Stbl4 高效感受态细胞,Stbl4感受态细胞,Stbl4 competent cell
Stbl4 高效感受态细胞,Stbl4感受态细胞,Stbl4 competent cell
货号 品名 规格 单位
北京华越洋GX0121-100 Stbl4 感受态细胞 100ul*20 包
北京华越洋GX0121-100s Stbl4 感受态细胞 100ul*10 包
-70℃保存,避免反复冻融。不适合在液氮中保存。
Stbl4 感受态细胞产品说明:
Stbl4 菌株来源于 Stbl2 菌株(Stbl2 为 JM109 衍生菌株),用于克隆不稳定序列(如重复序列,逆转录病毒序列等)和甲基化的 DNA 序列,特别适合构建重组逆转录病毒或慢病毒质粒。可用于大质粒的构建和扩增,适用于构建和扩增质粒 cDNA 文库。区别于 Stbl2 菌株,Stbl4 菌株在 IPTG 和 X-gal 存在的条件下,可进行α 互补原理的蓝白斑筛选实验。感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19 质粒检测转化效率大于 108 cfu/μgDNA。
Stbl4 感受态细胞基因型: mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal- thi-1 supE44 λ- relA1 Δ(lac-proAB)/F′ proAB+ lacIqZΔM15Tn10(TetR)
菌株抗性:对氨苄青霉素,卡那霉素,壮观霉素敏感。对四环素有抗性。
Stbl4 感受态细胞
质粒转化步骤: 1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入 1-5μl 含有 1-100ng 的质粒 DNA 或 5-10μl 连接产物到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀;
2. 冰水浴中放置 15-30 分钟,不要晃动;
3. 42℃热击 60 秒钟,不要晃动;
4. 冰水浴中放置 2 分钟,不要晃动;
5. 加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基;
6. 置于 37℃摇床中,150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟;
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃培养 12-18 小时。(当克隆不稳定片段时,为了降低重组错误率,复苏培养和涂布培养最好采用 30℃的培养条件,平板在30℃培养时需要 24 小时左右。) (平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm 离心 30 秒钟,弃掉上清,留 100μl 左右的液体,用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块,取 10μl 重悬的菌液分多点滴在抗性 LB 平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平 板上的液体来回划线。37℃培养过夜。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。)
Stbl4 感受态细胞
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