DH5α电转感受态细胞


DH5α Electroporation Competent Cell

编号

名称

规格

北京华越洋01gc44els

DH5α电击/电转感受态细胞

10×50ul

 

DH5α电转感受态细胞基因型:

F-,φ80dlacZ ΔM15,Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 ,hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi-1, gyrA96 , relA1

 

DH5α电转感受态细胞产品介绍:

       DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。DH5α电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。缺失核酸内切酶 (endA1),提高了质粒 DNA 的产量和质量;重组酶缺陷型(recA1)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入 DNA 的稳定性;由于 lacZΔM15 的存在以及 lac lq 基因的缺失,故不需要加 IPTG,只需要添加 X-Gal 就可进行基于α互补原理上的蓝白斑筛选实验。感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19 质粒检测转化效率大于 1010 cfu/μg DNA

 

DH5α电转感受态细胞菌株抗性:对氨苄青霉素,卡那霉素,链霉素,四环素和壮观霉素敏感。

 

DH5α电转感受态细胞操作步骤:

1. 电极间距为 2.5px 的电转杯(Gene Pulser®/MicroPulser electroporation cuvettes)插入碎冰中,压实冰面,冰中静置 5 分钟,使电转杯充分降温。(电转杯重复使用方法:每次用完后,用大量的自来水冲洗干净去掉菌液和 DNA,用蒸馏水洗 3 遍,将其泡在 75%乙醇中 30 分钟,取出杯子,沥干液体,放在超净台中,使乙醇充分挥发,盖上盖子放干燥地方备用)。

2. -70℃保存的感受态细胞插入冰中,待细胞刚化冻后,加入质粒 DNA 或连接产物(洗脱或溶解质粒的溶液中离子不能太高,或用双蒸水稀释,对照 pUC19 可以用无菌水稀释到 10pg/μl),用手指拨打管底轻轻混匀,立即插入冰中,在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA 混合物快速转移到电击杯中,避免产生气泡,确保细胞沉到杯底,盖上杯盖,空管保留待用。

3. 启动电转仪,设置电击参数: 2.0 kV200Ω,25μFBTX ECM 630Bio-Rad GenePulser)。用纸巾擦掉电转杯外部的水分,将电转杯放入电转槽中进行电击。完成后,将电转杯插入冰中,加入950μl无抗生素的SOCLB培养基,并将液体转移到原来保留的感受态空管中,37℃,150-250rpm振荡培养1小时。

4. 100-200μl 左右的菌液或稀释后的菌液,涂布于含相应抗生素的 LB 平板上,倒置放于 37℃培养箱培养 12-18 小时。

 

DH5α电转感受态细胞注意事项:

1. 电转杯必须预冷。

2. 感受态细胞应该在冰水浴中化冻,加入 DNA 后应轻柔混匀,加入 DNA 的体积小于细胞体积的 1/10

3. 一旦 DNA 加入到细胞中,电击操作应该立即进行。

4. DNA 应该溶解在水或 TE 中,连接酶的存在会降低转化效率,必要时需纯化连接产物。5. 电击时,电转杯中的气泡和含高浓度盐离子的 DNA 或转化产物会导致电弧现象的发生。

6. 电击完成后应该立刻加上 LB SOC 等复苏培养基,每分钟延迟加入会导致 3 倍转化效率的降低。


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