T7 表达感受态细胞，T7感受态细胞

T7 表达感受态细胞，T7感受态细胞

品名          规格         单位  品牌            货号    

T7 表达感受态细胞       100ul*20         包     waryong      GX0111-100       询价

T7 表达感受态细胞    100ul*10        包     waryong         GX0111-100s  

T7ExpressCompetentcells产品介绍
T7 Express菌株为大肠杆菌BL21增强型菌株，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型，主要适用于含有T7启动子的原核表达载体(如pET等)的蛋白表达，同样适用于需要大肠杆菌RNA聚合酶来转录RNA的非T7启动子的表达载体（如pGEX等）。该菌株区别于BL21(DE3)菌株的优势在于T7 RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域，基因组中无λ前噬菌体序列，并具有抗T1噬菌体感染等特点。T7表达感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率大于10的8次方cfu/μg DNA。 

T7 表达感受态细胞,T7ExpressCompetentcells产品特点
对氨苄青霉素，卡那霉素，壮观霉素，氯霉素，链霉素和四环素敏感。 

产品储存

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

T7 表达感受态细胞,T7ExpressCompetentcells产品说明： T7 Express 菌株为大肠杆菌 BL21 增强型菌株，为 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型，主要适用于含有 T7 启动 子的原核表达载体(如 pET 等)的蛋白表达，同样适用于需要大肠杆菌 RNA 聚合酶来转录 RNA 的非 T7 启动子 的表达载体（如 pGEX 等） 。该菌株区别于 BL21(DE3)菌株的优势在于 T7RNA 聚合酶基因整合在细菌染色体 上的 lac 操纵子区域，基因组中无λ前噬菌体序列，并具有抗 T1 噬菌体感染等特点。T7 表达感受态细胞经特 殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率大于 108 cfu/μgDNA。

T7 表达感受态细胞,T7ExpressCompetentcells基因型： fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1(mcrCmrr)114::IS10

菌株抗性：对氨苄青霉素，卡那霉素，壮观霉素，氯霉素，链霉素和四环素敏感

T7 表达感受态细胞,T7ExpressCompetentcells质粒转化步骤：

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的质粒 DNA 或 5-10μl 连接产物到细胞中，用手指拨打管底，轻轻混匀；

2. 冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动；

 3.42℃热击 60 秒钟，不要晃动；

 4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动；

 5. 加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基；

 6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟；

 7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养 12-18 小时。 （平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块，取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。） （质粒快速转化步骤：将步骤 2 的时间缩短到 5 分钟，对于氨苄青霉素抗性的质粒，步骤 4 完成后，可直 接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板上。其它抗性的质粒仍需 60 分钟的复苏培养。）

T7 表达感受态细胞,T7ExpressCompetentcells蛋白表达步骤：

 1. 挑取单菌落，接种到含 5ml 带抗生素的 LB 培养基中；

 2. 37℃，200rpm 震荡培养细菌至对数生长期（OD600=0.4-0.8） ；

 3. 加入 IPTG 到终浓度为 0.4mM，37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜；

 4. 诱导完成后，离心收集菌体，用合适的方法（如考马斯亮蓝染胶法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分，明确表达产物的表达状况（可溶性或不溶性表达）；

5. 大量表达时， 可用10ml过夜培养物转接到1L培养基中，当培养到OD600=0.4-0.8时， 加入终浓度为0.4mM 的 IPTG，37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜（不同蛋白表达的最佳条件有所不同，需在实验中优化

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