植物样品免DNA提取直接pcr试剂盒
植物样品免DNA提取直接PCR试剂盒
| 品名 | 货号 | 单位 | 品牌 | |
| 植物样品免DNA提取直接PCR试剂盒 | 0416-100AB | 盒 | 华越洋 |
只需要待处理的植物组织，引物就可以完成植物样品的直接PCR结果，
可直接将PCR产物上样电泳检测。全过程15分钟完成。
组分
溶液A | 0.5 ml |
溶液B | 1 ml |
缓冲液N | 5 ml |
2 × Direct PCR Mix | 1 ml |
ddH2O(PCR级) | 10 ml |
植物样品免DNA提取直接PCR试剂盒
产品特点：利用该试剂盒可以在15 分钟内开始从叶子（或其他植物组织）进行基因组DNA 的PCR 。该方法不需要用液氮对植物组织进行冰冻、机械处理、纯化或者DNA 的沉淀。该试剂盒也可以对提取的基因组DNA 进行PCR 扩增。PCR试剂含有染料，可以直接在电泳胶上样。0.5 到17.5px 的植物叶片与提取液在95 度孵育10 分钟提取基因组DNA。加入同样体积的稀释液中和。然后可以取部分提取物进行PCR 扩增。产品储存：2 × DirectPCR Mix -20℃ 保存，避免反复冻融次数过多，3周内短时间使用可放4℃保存。其余常温或者4℃保存，有效期12个月。
制品说明：本制品采用独特的裂解缓冲液快速裂解植物组织，释放的DNA无需纯化便可以作为模板，用高度耐抑制物的2 × Direct PCR Mix扩增，扩增产物可直接上样电泳。
适用范围：简单非多糖、多酚植物等含有PCR干扰物质。
特点：简单，高通量筛选；一般扩增大小<2kb。
植物样品免DNA提取直接pcr试剂盒
操作步骤：
1. 配制即用裂解液：按照5μl S溶液A+ 10μl 溶液B+ 85μl ddH2O = 100μl 比例配制成即用裂解液。每个样品需要50μl即用裂解液，具体量可以根据样品数量按照比例放大配制即可。
2. 取50μl裂解液于0.2 mL PCR薄壁管中（没有PCR仪器者也可以用0.5ml离心管）。然后置测试材料叶片（一般20mm2左右，可剪成3/4条放入）与裂解液中（也可以用吸头戳几下帮助裂解），吹打或者涡旋混匀，确保叶片碎块浸没在裂解液内。
3. 98℃裂解30min（建议PCR仪上操作），根据情况裂解时间可以在15分钟-1小时内调整。
4. 取出离心管迅速放冰上，加入50μl缓冲液 N，混匀，即可直接用做PCR模板或置于4℃或-20℃保存。
5. PCR扩增：
建议PCR条件(以20 μl反应体系为例)
Components | Volume | Final Concentration |
裂解混合物模板 | 1 μl | as required |
2 × DirectAmp PCR Mix | 10 μl | 1 × |
Forward Primer (10 μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
ddH2O to final volume | 20 μl | Not applicable |
PCR 循环
1 95℃ 5-10 min
2 94℃ 30 sec
3 54-60℃ 30 sec 2-4 35-40 cycles
4 72℃ 1 kb/min
5 72℃ 5-10 min
植物样品免DNA提取直接pcr试剂盒
注意事项:
1. 如果扩增条带较弱，可以适当增加减少模板加入量，裂解混合物模板一般可以在0.5μl-2μl内调节，但是注意一般不能超过4μl，加入太多，反而抑制PCR反应。
2. 如果样品多酚多糖较多，扩增效果不理想，可在20 μl PCR反应体系加入2μl 华越洋生产的多糖多酚清除剂改善效果。
3. 如果非特异扩增较多，可调整退火温度，或者适当增减模板用量。
4. 各溶液使用完毕后，应该立刻盖紧盖子，以免PH改变影响质量。
