NEB 10-beta 感受态细胞

NEB 10-beta 感受态细胞，NEB 10-beta  competent  cell

货号                                                            品名                 规格           单位                        

北京华越洋GX0191-100    NEB 10-beta 感受态细胞     100ul*20         包            询价

北京华越洋GX0191-100s       NEB 10-beta 感受态细胞      100ul*10      包   

-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

产品介绍： 本公司生产的NEB 10-beta感受态细胞是采用大肠杆菌NEB 10-beta菌株经特殊工艺处理得到的感受态细 胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达109-1010cfu/μg，-70 ℃保存6个月转化效率.

NEB 10-beta 感受态细胞产品特点
1.大肠杆菌K12菌株背景，DH10B菌株的衍生菌株，核基因中具有链霉素抗性基因(StrR)。 
2.可转化大质粒和BACs。
3.DNA重组缺陷(recA1)和内切酶 I缺陷(endA1)的特点有利于DNA克隆的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
4.对T1噬菌体有抵抗能力（fhuA2）。
5.无需添加IPTG，只加X-gal即可检测beta半乳糖苷酶活性，用于蓝白斑筛选。

NEB 10-beta 感受态细胞基因型：

araD139∆(ara-leu)7697fhuAlacX74galK(f80∆(lacZ)M15)mcrAgalUrecA1endA1nupGrpsL(StrR)∆(mrr-hsdRMSmcrBC)

 NEB 10-beta 感受态细胞操作步骤（以下操作均按无菌条件的标准进行）：

提示

 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。

 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。

 1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。 （一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用 DNA 体积 不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以 100μl 感受态细胞为例。）

 2. 向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(100μl 的感受态细胞能够被 1ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），轻 轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。

3. 将离心管置于 42℃水浴中放置 90 秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2 分钟，该过程不要摇 动离心管。（此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置 5-8 分钟左右；如果室温较低，可延长时间至 8-15 分钟左右。条件允许建议使用 42℃热激方法。）

4. 向每个离心管中加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 150rpm，摇床 振荡培养 45 分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 5. 无菌条件下，取适量菌液加到含相应抗生素的 LB 固体培养基平板上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将 细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。（涂布用量可根据具 体实验来调整。转化质粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；连接产物的转 化菌液建议离心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。） 6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。

NEB 10-beta 感受态细胞

相关试剂及培养基的制备方法：

1. LB 液体培养基：称取 10g，Tryptone，5gYeastExtract 和 10gNaCl 置于 1L 烧杯中。加入约 800ml 的去 离子水，完全溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0。加去离子水定容至 1L。分装后，121℃ 高压灭菌 20 分钟。

2. SOB 和 SOC 培养基：称取 20gTryptone，5gYeastExtract，0.5gNaCl 置于 1L烧杯中加入约 800ml 的去 离子水，完全溶解后再补加 10ml250mMKCl 溶液，滴加 5MNaOH（约 0.2ml）调 pH 值 7.0。加入去 离子水将培养基定容至 1L。121℃灭菌 20 分钟。使用时加入 5ml 灭菌的 2MMgCl2 溶液（此种培养基 称为 SOB） 。再补加经 0.22um 过滤除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此种培养基为 SOC）。

 3. 转化复苏细菌用的液体 LB 培养基或 SOC 培养基：可以一次高压 50ml 液体培养基，无菌状态按 1ml 每管分装于高压灭菌的 1.5ml 离心管中，装于自封袋中，冻存于-20℃中，每次用一支。可以极大地避免培养基污染和减少劳动量。

 4. LB 固体选择培养基：100ml LB 液体培养基中加入 1.5g 琼脂粉，摇匀后，121℃高压灭菌 20 分钟。冷 却至 50℃左右时加入相应浓度的抗生素（如 AMP 浓度通常为 100ug/ml），混匀后倒在细菌用的无菌培养皿中，等琼脂凝固后即可使用。

 5. IPTG：称量 1.9gIPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 灭菌水，浓度为 200mmol/L。用无菌 0.22μm 过滤膜过滤除菌。小份分装后，-20℃保存。

 6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分装（1ml/份）后，-20℃避光保存。

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