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酵母转化试剂盒

@酵母转化试剂盒

酵母转化试剂盒

 

 

酵母转化试剂盒

储存条件:Carrier DNA -20 度保存,其他室温保存.

 

 

50% PEG Solution

50 ml

1M LiAc Solution

50 ml

Carrier DNA, 5 mg/ml

2×1 ml

说明书

1

 

酵母转化试剂盒酵母感受态细胞的制备:

 

1. 活化菌种。-80保存的菌种在固体 YPDA 培养基(YPDA 20g Agar/L)上划线,在 30培养 2-4 天。

2. 挑取酵母单菌落在固体 YPDA 培养基上划 3-5 mm 的短线,在 30 培养 2-4 天。待酵母单菌落长至 2 mm长时,接种。

3. 首先把酵母细胞接种到 3 ml 液体 YPDA 培养基中,30过夜培养。

4. 第二天转接到含有 30 ml 液体 YPDA 培养基的三角瓶中继续培养,待 OD600 0.4-0.5 范围内。收集细胞,1000 g,离心 5 min, 去上清。

5. 沉淀用 30-50 ml 的无菌的去离子水悬浮。1000 g,离心 5 min,去上清。

6. 沉淀用合适体积的 100 mM LiAc 悬浮(30 ml 的酵母菌最多用不超过 1 ml 100 mM LiAc 悬浮,通常 100 μl 的酵母细胞用于转化一个质粒,即一个反应)。

7. 把酵母细胞的悬浮液分装到 1.5 ml 的离心管中,每管分装 100 μl,用于转化一个质粒即一个反应。1000 g,离心 5 min,去上清。制备好的感受态细胞备用。

 

 酵母转化试剂盒

酵母转化:

1. 配制预混液,每转化一个质粒即一个反应需要 360 μl 的预混液。

 

50% PEG

240 μl



1 M LiAc

36 μl



Carrier DNA5 mg/ml

10 μl



质粒(大约 200 ng/μl

5 μl(根据质粒的浓度加入相应的体积)



总体积

360 μl



 

2. 吸取 360 μl 的预混液加入到感受态细胞中,用枪头反复吹吸沉淀,使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有 PEG 的预混液中。

 

3. 放置在 30 的水浴锅中孵育 30 min,每 10 min 混匀一次。

4. 放置在 42 的水浴锅中热击 30 min,每 10 min 混匀一次。

5. 12000 rpm,离心 1 min,去掉上清液。

6. 沉淀中加入 100 μl 的无菌的去离子水,悬浮沉淀。

7. 把酵母细胞涂到相应的酵母培养基平板上,30培养 2-4 天。

 

酵母转化试剂盒注意事项:

1. 初次使用 Carrier DNA,请把装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮沸 5 min,然后立即放在冰上,用后放在-20储存备用。下次使用时请在冰上解冻 Carrier DNA

 

2. PEG 溶液在低温环境下会析出,请于常温环境下完全溶解后使用。

3. 转化全程要无菌操作。

酵母转化试剂盒