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血液DNA提取试剂盒

血液DNA提取试剂盒

血液DNA提取试剂盒

血液DNA提取试剂盒

产品介绍:

本试剂盒采用进口DNA吸附材料和独特的缓冲液体系,用于快速提取血液基因组中的DNA。独特的缓冲液体系和蛋白酶K能快速裂解细胞或组织,离心吸附柱采用进口硅基质材料,能够实现选择性吸附DNA,蛋白质和其它杂质会在离心时随溶液穿透,,最大程度地保证了吸附柱上DNA的纯度和产量。

本试剂盒适用于各种哺乳动物、禽类、两栖类等动物血液基因组DNA提取,操作过程快速、简捷,提取得到的基因组DNA片段大、纯度高,适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Soμthern杂交等实验。

血液DNA提取试剂盒规格及组成:

组  成

50次包装

100次包装





10×红细胞裂解液

20 ml

40 ml


溶液A

15 ml

30 ml


溶液B

15 ml

30 ml


溶液C

25 ml

50 ml


漂洗液

50 ml

100 ml


DNA洗脱液

10 ml

10 ml


蛋白酶K

1 ml

2 ml


DNA吸附柱

50 套

100 套


使用手册

1份

1份


 血液DNA提取试剂盒使用方法: 

注意:溶液A在低温下长期放置可能会产生沉淀。若出现沉淀,使用前经45℃水浴10min,使沉淀彻底溶解,充分摇匀后即可使用。

1. 裂解红细胞:(仅针对哺乳动物血液)

a. 根据需要提前将10×红细胞裂解液稀释至1×,充分混匀,备用。

b. 100~1000ul新鲜、冷冻或加入了各种抗凝剂的血液,放入1.5mL或15mL的离心管中。

c. 加入3倍体积的1×红细胞裂解液,颠倒6~8次,并轻弹管壁,确保充分混匀。

d. 室温放置10分钟(期间应该颠倒轻弹混匀数次,帮助裂解红细胞)。

e. 10,000~11,000×g离心1分钟(对于1.5mL离心管)或2,000~3,000×g离心5分钟(对于15mL离心管),倒弃红色上清,并小心的尽可能多地吸取上清(注意不要吸到底部的细胞团),留下完整的管底白细胞团和大约10ul的残留上清。

提示一:离心后在管底应该看到白色的白细胞团,也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起,但是如果看到的是大部分的红色细胞团,说明红细胞裂解很不充分,应该再加入红细胞裂解液重悬细胞团后重复红细胞裂解的步骤。

提示二:当离心力较大或者离心时间较长时,虽然可以快速沉淀白细胞,但是容易造成白细胞沉淀过于紧密,给后续重悬带来困难。当出现这种问题时,可以适当减小离心力或减少离心时间。

f. 以上红细胞裂解步骤仅针对哺乳动物血液,禽类、鸟类、两栖类或更低等生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量5~20ul,可加溶液A补足200ul后,进行第3步操作。

2. 加入200ul溶液A,涡旋振荡重悬白细胞团,充分分散白细胞团。

3. 加入20ul蛋白酶K(20mg/mL)溶液,充分混匀。

4. 加入200ul溶液B,立即涡旋振荡充分混匀,在56放置10分钟,期间轻柔地振荡几次帮助裂解。溶液应变清亮(但颜色偏黑)。

5. 待溶液冷却后,加入200μl无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀。

6. 将上一步所得溶液(包括可能有的沉淀)加入到一个DNA吸附柱中(每次最多700μl,多可以分两次),室温12,000×g离心1分钟,弃穿透液

7. DNA吸附柱中加入500μl溶液C,静置30秒,室温12,000×g离心1分钟,弃穿透液

说明:溶液C可以去除残留的RNA及蛋白质污染。

8. DNA吸附柱中加入500μl漂洗液,室温12,000×g离心1分钟,弃穿透液

加入500μl漂洗液,重复一遍。

9. 室温12,000×g离心2分钟。此步非常重要,否则残留的乙醇会影响DNA的使用。

10. DNA吸附柱转移到一新的收集管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50~100μl DNA洗脱液,室放置3~5分钟

11. 室温12,000×g离心2分钟,离心管中溶液即为DNA样品,可以立即使用或存放于-20℃待用

 

 血液DNA提取试剂盒