血液DNA提取试剂盒
血液DNA提取试剂盒
血液DNA提取试剂盒
产品介绍:
本试剂盒采用进口DNA吸附材料和独特的缓冲液体系,用于快速提取血液基因组中的DNA。独特的缓冲液体系和蛋白酶K能快速裂解细胞或组织,离心吸附柱采用进口硅基质材料,能够实现选择性吸附DNA,蛋白质和其它杂质会在离心时随溶液穿透,,最大程度地保证了吸附柱上DNA的纯度和产量。
本试剂盒适用于各种哺乳动物、禽类、两栖类等动物血液基因组DNA提取,操作过程快速、简捷,提取得到的基因组DNA片段大、纯度高,适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Soμthern杂交等实验。
血液DNA提取试剂盒规格及组成:
组 成 | 50次包装 | 100次包装 | |
10×红细胞裂解液 | 20 ml | 40 ml | |
溶液A | 15 ml | 30 ml | |
溶液B | 15 ml | 30 ml | |
溶液C | 25 ml | 50 ml | |
漂洗液 | 50 ml | 100 ml | |
DNA洗脱液 | 10 ml | 10 ml | |
蛋白酶K | 1 ml | 2 ml | |
DNA吸附柱 | 50 套 | 100 套 | |
使用手册 | 1份 | 1份 |
血液DNA提取试剂盒使用方法:
注意:溶液A在低温下长期放置可能会产生沉淀。若出现沉淀,使用前经45℃水浴10min,使沉淀彻底溶解,充分摇匀后即可使用。
1. 裂解红细胞:(仅针对哺乳动物血液)
a. 根据需要提前将10×红细胞裂解液稀释至1×,充分混匀,备用。
b. 取100~1000ul新鲜、冷冻或加入了各种抗凝剂的血液,放入1.5mL或15mL的离心管中。
c. 加入3倍体积的1×红细胞裂解液,颠倒6~8次,并轻弹管壁,确保充分混匀。
d. 室温放置10分钟(期间应该颠倒轻弹混匀数次,帮助裂解红细胞)。
e. 10,000~11,000×g离心1分钟(对于1.5mL离心管)或2,000~3,000×g离心5分钟(对于15mL离心管),倒弃红色上清,并小心的尽可能多地吸取上清(注意不要吸到底部的细胞团),留下完整的管底白细胞团和大约10ul的残留上清。
提示一:离心后在管底应该看到白色的白细胞团,也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起,但是如果看到的是大部分的红色细胞团,说明红细胞裂解很不充分,应该再加入红细胞裂解液重悬细胞团后重复红细胞裂解的步骤。
提示二:当离心力较大或者离心时间较长时,虽然可以快速沉淀白细胞,但是容易造成白细胞沉淀过于紧密,给后续重悬带来困难。当出现这种问题时,可以适当减小离心力或减少离心时间。
f. 以上红细胞裂解步骤仅针对哺乳动物血液,禽类、鸟类、两栖类或更低等生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量5~20ul,可加溶液A补足200ul后,进行第3步操作。
2. 加入200ul溶液A,涡旋振荡重悬白细胞团,充分分散白细胞团。
3. 加入20ul蛋白酶K(20mg/mL)溶液,充分混匀。
4. 加入200ul溶液B,立即涡旋振荡充分混匀,在56℃放置10分钟,期间轻柔地振荡几次帮助裂解。溶液应变清亮(但颜色偏黑)。
5. 待溶液冷却后,加入200μl无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
6. 将上一步所得溶液(包括可能有的沉淀)加入到一个DNA吸附柱中(每次最多700μl,多可以分两次),室温12,000×g离心1分钟,弃穿透液。
7. 向DNA吸附柱中加入500μl溶液C,静置30秒,室温12,000×g离心1分钟,弃穿透液。
说明:溶液C可以去除残留的RNA及蛋白质污染。
8. 向DNA吸附柱中加入500μl漂洗液,室温12,000×g离心1分钟,弃穿透液。
加入500μl漂洗液,重复一遍。
9. 室温12,000×g离心2分钟。此步非常重要,否则残留的乙醇会影响DNA的使用。
10. 将DNA吸附柱转移到一新的收集管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50~100μl DNA洗脱液,室温放置3~5分钟。
11. 室温12,000×g离心2分钟,离心管中溶液即为DNA样品,可以立即使用或存放于-20℃待用。
血液DNA提取试剂盒