血液基因组DNA提取试剂盒

血液基因组DNA提取试剂盒

◆常温，避光保存◆仅限于实验室使用

产品介绍：

本试剂盒采用进口DNA吸附材料和独特的缓冲液体系，用于快速提取血液基因组中的DNA。独特的缓冲液体系和蛋白酶K能快速裂解细胞或组织，离心吸附柱采用进口硅基质材料，能够实现选择性吸附DNA，蛋白质和其它杂质会在离心时随溶液穿透，，最大程度地保证了吸附柱上DNA的纯度和产量。

本试剂盒适用于各种哺乳动物、禽类、两栖类等动物血液基因组DNA提取，操作过程快速、简捷，提取得到的基因组DNA片段大、纯度高，适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Soμthern杂交等实验。

血液基因组DNA提取试剂盒规格及组成：

使用方法：

注意：溶液A在低温下长期放置可能会产生沉淀。若出现沉淀，使用前经45℃水浴10min，使沉淀彻底溶解，充分摇匀后即可使用。

1.     裂解红细胞：(仅针对哺乳动物血液)

a.    根据需要提前将10×红细胞裂解液稀释至1×，充分混匀，备用。

b.    取100~1000ul新鲜、冷冻或加入了各种抗凝剂的血液，放入1.5mL或15mL的离心管中。

c.    加入3倍体积的1×红细胞裂解液，颠倒6~8次，并轻弹管壁，确保充分混匀。

d.    室温放置10分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次，帮助裂解红细胞）。

e.    10,000~11,000×g离心1分钟（对于1.5mL离心管）或2,000~3,000×g离心5分钟（对于15mL离心管），倒弃红色上清，并小心的尽可能多地吸取上清（注意不要吸到底部的细胞团），留下完整的管底白细胞团和大约10ul的残留上清。

提示一：离心后在管底应该看到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入红细胞裂解液重悬细胞团后重复红细胞裂解的步骤。

提示二：当离心力较大或者离心时间较长时，虽然可以快速沉淀白细胞，但是容易造成白细胞沉淀过于紧密，给后续重悬带来困难。当出现这种问题时，可以适当减小离心力或减少离心时间。

f.     以上红细胞裂解步骤仅针对哺乳动物血液，禽类、鸟类、两栖类或更低等生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5~20ul，可加溶液A补足200ul后，进行第3步操作。

2.     加入200ul溶液A，涡旋振荡重悬白细胞团，充分分散白细胞团。

3.     加入20ul蛋白酶K(20mg/mL)溶液，充分混匀。

4.     加入200ul溶液B，立即涡旋振荡充分混匀，在56℃放置10分钟，期间轻柔地振荡几次帮助裂解。溶液应变清亮（但颜色偏黑）。

5.     待溶液冷却后，加入200μl无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

6.     将上一步所得溶液（包括可能有的沉淀）加入到一个DNA吸附柱中（每次最多700μl，多可以分两次），室温12,000×g离心1分钟，弃穿透液。

7.     向DNA吸附柱中加入500μl溶液C，静置30秒，室温12,000×g离心1分钟，弃穿透液。

说明：溶液C可以去除残留的RNA及蛋白质污染。

8.     向DNA吸附柱中加入500μl漂洗液，室温12,000×g离心1分钟，弃穿透液。

加入500μl漂洗液，重复一遍。

9.     室温12,000×g离心2分钟。此步非常重要，否则残留的乙醇会影响DNA的使用。

10.  将DNA吸附柱转移到一新的收集管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50～100μl DNA洗脱液，室温放置3～5分钟。

11.  室温12,000×g离心2分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于-20℃待用。

血液基因组DNA提取试剂盒