琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

一、试剂盒组成、储存、稳定性

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

注意：

1.第一次使用前请现在漂洗液W中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时标记，以免多次加入！

2.溶胶结合液BD低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

3.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

二、试剂盒特点

    1.快速、简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

    2.使用了优质的溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸钠，不抑制回收后酶切、链接、克隆等下游反应。

    3.本试剂盒用从于从琼脂糖凝胶中回收100bp-5kb的片段(片段大于5kb或小于100bp回收效率可能会降低)

三、注意事项（实验前必须首先阅读这部分！）

  1.所有离心步骤均在室温完成，使用转数可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

    2.溶胶结合液有含有刺激性化合物，操作是要带乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗。

  3.胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能的使用能量低的长波紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理时间，更好的选择是使用可见光透射仪，可以避免DNA的损坏、突变。

    4.洗脱缓冲液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、链接等实验。

四、自备试剂 无水乙醇

五、操作步骤

*第一次使用前请先在漂洗液W中加入指定量的无水乙醇！

 1.   切取含有目的DNA条带的凝胶放入1.5ml离心管中，尽量切除不含DNA的凝胶，得到的凝胶越小越好，称重。（先称一个空1.5ml离心管重量，然后放入凝胶后再称一次，两次重量相减，得到凝胶的重量。）

 2.  加1-2倍体积的溶胶结合液BD

如果凝胶重0.1g，其体积视为100ul，加入100ul-200ul溶胶液。

    如果凝胶浓度大于2%，应加入2-4倍体积溶胶液

    凝胶块最大不能超过400mg，如果超过400mg，请用多个离心柱进行回收。

 3.  56℃水浴放置3-5分钟（或直至胶完全溶解，如果没有溶解完全，会影响回收率）。每1-2分钟漩涡混匀一次帮助加速溶解。

 4.  将上一步所得溶液加入离心吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

 如果总体积超过900ul，可分多次将溶液加入同一个吸附柱中。

 5.  加入500ul漂洗液W（请检测是否加入无水乙醇！），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。

6.  重复步骤5一次。

 7. 将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2分钟，转移吸附柱到新的1.5ml离心管中，室温放置3分钟，以彻底晾干吸附柱中的残余漂洗液。

 8. 加入20-50ul洗脱液EB（洗脱液EB事先65-70℃预热洗脱效果会更好）室温放置3分钟，12000rpm离心2分钟。

注意：1.洗脱缓冲液应不少于20ul，体积过小影响回收效率。

      2.为增加DNA的得率，可将离心得到的DNA溶液再加入核酸吸附柱温静止2分钟12000rpm离心2分钟

      3.DNA产物应保存在-20℃，以防降解