酵母转化试剂盒
酵母转化试剂盒使用说明书
储存条件：Carrier DNA -20 度保存，其他室温保存.
50% PEG Solution | 50 ml |
1M LiAc Solution | 50 ml |
Carrier DNA, 5 mg/ml | 2×1 ml |
说明书 | 1 份 |
酵母转化试剂盒 酵母感受态细胞的制备：
1. 活化菌种。-80℃保存的菌种在固体 YPDA 培养基（YPDA 加 20g Agar/L）上划线，在 30℃培养 2-4 天。
2. 挑取酵母单菌落在固体 YPDA 培养基上划 3-5 mm 的短线，在 30 ℃培养 2-4 天。待酵母单菌落长至 2 mm长时，接种。
3. 首先把酵母细胞接种到 3 ml 液体 YPDA 培养基中，30℃过夜培养。
4. 第二天转接到含有 30 ml 液体 YPDA 培养基的三角瓶中继续培养，待 OD600 到 0.4-0.5 范围内。收集细胞，1000 g，离心 5 min, 去上清。
5. 沉淀用 30-50 ml 的无菌的去离子水悬浮。1000 g，离心 5 min，去上清。
6. 沉淀用合适体积的 100 mM LiAc 悬浮（30 ml 的酵母菌最多用不超过 1 ml 的 100 mM LiAc 悬浮，通常 100 μl 的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应）。
7. 把酵母细胞的悬浮液分装到 1.5 ml 的离心管中，每管分装 100 μl，用于转化一个质粒即一个反应。1000 g，离心 5 min，去上清。制备好的感受态细胞备用。
酵母转化试剂盒酵母转化：
1. 配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要 360 μl 的预混液。
50% PEG | 240 μl |
1 M LiAc | 36 μl |
Carrier DNA（5 mg/ml） | 10 μl |
质粒（大约 200 ng/μl） | 5 μl（根据质粒的浓度加入相应的体积） |
总体积 | 360 μl |
2. 吸取 360 μl 的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有 PEG 的预混液中。
3. 放置在 30 ℃的水浴锅中孵育 30 min，每 10 min 混匀一次。
4. 放置在 42 ℃的水浴锅中热击 30 min，每 10 min 混匀一次。
5. 12000 rpm，离心 1 min，去掉上清液。
6. 沉淀中加入 100 μl 的无菌的去离子水，悬浮沉淀。
7. 把酵母细胞涂到相应的酵母培养基平板上，30℃培养 2-4 天。
注意事项：
1. 初次使用 Carrier DNA，请把装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮沸 5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻 Carrier DNA。
2. PEG 溶液在低温环境下会析出，请于常温环境下完全溶解后使用。
3. 转化全程要无菌操作。
酵母转化试剂盒
