GM2163感受态细胞

                                    GM2163感受态细胞 化转 电转 电击

GM2163 Chemically Competent Cell 

GM2163感受态细胞基因型

F–ara–14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22 mcrA dcm–6 hisG4 rfbD1 rpsL136 dam13::Tn9 xylA5 mtl–1 thi-1 mcrB1 hsdR2

产品说明GM2163菌株是甲基化基因dam、dcm缺失的 K12 菌株，提取得到的质粒DNA可被对dam、dcm甲基化敏感的内切酶切割；无lacIqlacZΔM15，不可进行蓝白斑筛选；转化效率不高，一般不用于质粒构建，只适用于质粒转化。

GM2163感受态细胞操作方法

1. GM2163感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。

GM2163感受态细胞使用注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.若用氨苄抗生素筛选，应使用含100 μg/ml ampicillin的平板。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

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