SHuffle T7 ​感受态细胞

                    SHuffle T7 感受态细胞

        SHuffle T7 E. coli感受态细胞 Competent Cells

SHuffle T7 E. coli菌株是K12的衍生菌株。该菌株的染色体中整合了一个拷贝的二硫键异构酶 DsbC基因 ，可以促进含有二硫键蛋白的正确折叠；此外DsbC还是一个分子伴侣，可以帮助不含二硫键蛋白正确折叠，形成正确构象，同时该菌株可降低目的基因的本底表达，适合于毒性基因的原核表达。SHuffle T7 E. coli菌株染色体中整合了一个拷贝的T7 RNA 聚合酶基因，可以表达噬菌体T7 RNA聚合酶，适合于T7启动子诱导的蛋白表达；该菌株还可以表达大肠杆菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。SHuffle T7 E. coli菌株具有抗T1 噬菌体感染的特点，具有链霉素，壮观霉素抗性。SHuffle T7 E. coli感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA。

1. SHuffle T7 感受态细胞感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养（12-15 h）。

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

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