纤维素酶（CL）活性检测试剂盒

                                                  可见分光光度法 CAT:8890

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

纤维素酶（CL）活性检测试剂盒

溶液的配制：

标准品：10mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%）。临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，配制成 10mg/mL 葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

纤维素酶（CL）活性检测试剂盒产品说明：

CL存在于细菌、真菌和动物体内，能够催化纤维素降解，是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。

采用3,5-二硝基水杨酸法测定CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

 纤维素酶（CL）活性检测试剂盒

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量）

1、细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声冰浴破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

 2、组织：称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0mg/mL。

3、加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：

 纤维素酶（CL）活性检测试剂盒

三、CL活力计算

1、标准曲线的建立：

540nm处以水调零调零，读标准管吸光值 A。以浓度（y）为纵坐标，吸光度 A（x，减去浓度为0标准管的OD值）为横坐标建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA带入公式中（x）计算浓度y（mg/mL

2、按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力（U/mg prot）＝1000×y×V 反总÷（V 样×Cpr）÷ T=233×y÷Cpr

3、按样本质量计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力（U/g质量）＝1000×y×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T =233×y÷W

 4、按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。

CL 活力（U/10⁴ cell）＝1000×y×V 反总÷（500×V 样÷V 样总）÷T =0.467×y

1000：单位换算系数，1mg/mL=1000μg/mL；V反总：反应体系总体积，0.35mL；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500 万。

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