原果胶含量检测试剂盒
原果胶含量检测试剂盒
可见分光光度法 CAT:0832
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称 | 规格型号 | 保存条件 |
提取液一 | 液体 100 mL×1 瓶（自备） | 4℃保存 |
提取液二 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
提取液三 | 液体 50 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂一 | 液体 60 mL×1 瓶（自备） | 4℃保存 |
试剂二 | 液体 3 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 5 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
原果胶含量检测试剂盒 溶液的配制：
1、 提取液一：80%乙醇，自备。即将 80 mL 无水乙醇和 20 mL 蒸馏水混合。
2、 试剂一：浓硫酸 60 mL，自备。
3、 标准品：10 mg 半乳糖醛酸，临用前加入 0.943 mL 提取液三，配成 50 μmol/mL 的标准液。
产品说明：
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶，不溶性果胶为原果胶。原果胶是不溶于水的物质，但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下，加水分解转变成水溶性果胶，在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
原果胶在碱性条件下水解为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在530nm处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。
原果胶含量检测试剂盒 操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量）
取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴 20min，冷却至室温，4000g 25℃离心 10min， 弃上清。沉淀加入 1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗2遍（涡旋振荡 2min 左右，4000g 25℃离心 10min，弃上清即可），
沉淀即为粗细胞壁，加入 1mL 提取液二（去除淀粉）浸泡 15 小时，4000g 25℃离心 10min，弃上清，加入 1mL 提取液三，充分匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清液待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。
2、 将50μmol/mL标准液用提取液三稀释为0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL的标准溶液备用。
3、 操作表：
试剂名称 | 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 |
样本（μL） | - | - | 100 | 100 |
标准品（μL） | - | 100 | - | - |
蒸馏水（μL） | 100 | - | - | - |
试剂一（μL） | 800 | 800 | 800 | 800 |
混匀、90℃放置10min，取出后冷却 | ||||
试剂二（μL） | - | - | 100 | - |
试剂三（μL） | 100 | 100 | - | 100 |
混匀，25℃静置 30min 后测定 530nm 处吸光值，分别记为 A 空白管、A 标准管、A 对照管和 A 测定管。ΔA 标准=A 标准管-A 空白管，ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。 | ||||
原果胶含量检测试剂盒 三、原果胶含量的计算
1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。
2、 原果胶含量的计算：原果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液三÷W =x÷W V提取液三：加入提取液三的体积，1mL；W：样本质量，g。
原果胶含量检测试剂盒 注意事项：
1、 浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。
2、 若ΔA超过0.6，可将样本用提取液三进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
原果胶含量检测试剂盒 实验实例：
1. 取 0.1g 木槿加入 1mL 提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴 20min，冷却至室温，4000g 25℃离心 10min，弃上清。沉淀加入 1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗 2 遍（涡旋振荡 2min 左右，4000g 25℃离心 10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入 1mL 提取液二浸泡 15 小时，4000g 25℃离心 10min，弃上清，加入 1mL 提取液三，充分匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清液之后按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.194-0.044=0.15，依据标准曲线 y=0.9322x-0.0232，计算 X=0.1858μmol/mL；按样本质量计算含量得： 原果胶含量(μmol/g 质量)= x÷W=1.858 μmol/g 质量。
