过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒可见光分光光度法注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC0200
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒规格:50T/48S
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒
产品内容：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体320μL×1 瓶，4℃保存。
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒
溶液的配制：
1. 试剂二：液体置于试剂瓶内EP管中。
2. 检测工作液的配制：临用前取100ul试剂二加入20ml试剂一，充分混匀，作为工作液；或者根据比例配制，用不完的试剂4℃保存一周。
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产品说明：
CAT(EC1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的 H2O2清除酶，在活 性氧清除系统中具有重要作用。
H2O2在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解 H2O2，使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时 间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 CAT 活性。
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试验中所需的仪器和试剂：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
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操作步骤：
一、样本处理：
1、细菌、细胞或组织样品的制备
细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）： 提取液体积（ml）为 500-1000:1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细 菌或细胞（功率 20%或 200w，超声 3 秒，间隔 10 秒。重复 30 次）；8000g4℃离心 10 分钟，取上 清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积（ml）为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加 入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
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二、CAT 测定操作：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 240nm 处，蒸馏水调零。
2、 CAT 检测工作液的配置：用时在每瓶试剂二（100μL）中加入 20ml 试剂一，充分混匀，作为工 作液；用不完的试剂 4℃保存一周。
3、 测定前将 CAT 检测工作液 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）水浴 10min。
4、 取 1mLCAT 检测工作液于 1mL 石英比色皿中，再加入 35μL 样本，混匀 5s；室温下立即测定 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA=A1-A2
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三、CAT 活性计算：
1、 血清（浆）CAT 活力的计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位.
CAT（U/mL）＝﹝ΔA×V 反总÷（ε×d）×109﹞÷V 样÷T=678×ΔA
2.组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算：
（1） 按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。
CAT（U/mgprot）＝﹝ΔA×V 反总÷（ε×d）×109﹞÷（V 样×Cpr）÷T=678×ΔA÷Cpr
（2））按样本鲜重计算： 单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。 CAT（U/g 鲜重）＝﹝ΔA×V 反总÷（ε×d）×109﹞÷（W×V 样÷V 样总）÷T=678×ΔA÷W
3.按细菌或细胞中 CAT 活力计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化 1nmolH2O2降解定义为一个 酶活力单位。
CAT（U/104 cell）＝﹝ΔA×V 反总÷（ε×d）×109﹞÷（500×V 样÷V 样总）÷T=1.356×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1.035×10-3L；ε:H2O2摩尔吸光系数，4.36×104L/mol/cm；d：比色皿 光径，25px；V 样：加入样本体积，0.035ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，1min。 W，样本质量，g；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/ml；500：细胞或细菌总数，500 万。
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒
注意事项：
如果反应液有大量气泡产生，将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。
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