超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒
超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒
可见分光光度法，CAT:HYY843-50T
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒
规格：50T/24S
超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒
产品内容：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 160μL×1 支，4℃保存；使用前先离心再吹打混匀。
试剂三：液体 11mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1 支，4℃保存。
试剂五：液体 2mL×1 瓶，4℃保存；临用前将试剂四加入试剂五中，并震荡溶解。
超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。产品说明：
SOD是一种广泛存在于生物体内的金属酶，是重要的氧自由基清除剂，能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-)，O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在 560nm 处有吸收；SOD 可清除 O2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒
操作步骤：
一、样本处理：
1. 细菌或培养细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500-1000:1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1:5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤：
1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 560nm，蒸馏水调零。
2. 测定前将试剂一、三和五 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min 以上。
3. 样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）
充分混匀，37℃水浴 30min 后，置于 1mL 玻璃比色皿测定 560nm 下的吸光度，分别记为 A 测定、A 对照、A 空 1、A 空 2，计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 空白=A 空 1-A 空 2。
注意：
1、样本和试剂二使用时在冰上放置。
2、样本较多时，可按表格配置工作液（包含试剂一、二、三），试剂五必须最后加入。
3、空白管 1 和空白管 2 各只需做 1~2 管；每个样本有一个对照管。
4、反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可。
超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒
三、SOD 活性计算：
1、抑制百分率的计算
抑制百分率＝(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白× 100%
尽量使样品的抑制百分率在 30-70%范围内，越靠近 50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于 70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样品。
2、SOD 酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50%时，反应体系中的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位。
3、SOD 酶活性计算：
（1）血清（浆）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×V 反总]÷V 样×F
=11.4×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×F（2）组织、细菌或培养细胞 SOD 活力计算：
A 按样本蛋白浓度计算
SOD 活性 (U/mg prot)=[抑制百分率÷（1-抑制百分率）×V 反总]÷（V 样×Cpr）×F =11.4×抑制百分率÷( 1-抑制百分率) ÷Cpr×F
B 按样本质量计算
SOD 活性 (U/g 鲜重)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)×F =11.4×抑制百分率÷( 1-抑制百分率) ÷W×F
C 按细菌或细胞个数计算
SOD 活力 (U/104 cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)×F =0.0228×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×F
V 反总：反应体系总体积，1.026mL；V 样：加入反应体系中样本的体积，0.09mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数， 500 万，F：样本稀释倍数。
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