gus染色液，gus染色试剂盒使用说明书

GUS 染色试剂盒  size：50ml CAT:GT0391

试剂组分： 1ml 溶解液A，-20℃        粉末B，-20℃         50ml 缓冲液C，常温

产品简介：gus(β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶)基因是目前常用的一种报告基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶 (GUS)是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解，它可以将 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯分解为蓝色的物质，其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。因为绝大多数植物细胞内不存在内源的 GUS 活性，因此 gus 基因广泛用作转基因植物的报告基因，尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化实验中广泛应用。

该试剂盒包含 GUS 染色的全部试剂，使用方便，只需ABC三种溶液简单混合即配成 GUS 染色工作液。该试剂盒可以配制 50ml GUS 染色液。

GUS 染色工作液配制：将溶1ml华 越洋gus溶解液A加入粉末B中充分溶解混合，形成AB混合液。再将AB混合液1:50体积加入缓冲液C中（即1mlAB混合液加入到50ml缓冲液C中），配置成染色工作液。

注意：AB混合液稳定性较差，最好现用现配，建议如果1ml华 越 洋gus染色剂的AB混合液配置好后短时间内（10天左右）用不完，可将其分装保存在-80℃超低温冰箱，防止AB混合液有效成分分解。配置好的AB混合液，-20℃避光保存 20-30 天左右不变色，刚配制的AB混合液颜色为无色，贮存一段时间后，溶液可能变为红色或棕色，这表明AB混合液部分有效成分分解，但仍可继续使用，不会严重影响 GUS 底物的显色反应。

使用说明：

1.取材：将叶片、花瓣、根茎等组织剪成小片，放于 1.5ml 离心管或者其他器皿中。

注：用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物渗入细胞。                                                    2.染色：加入适量配制好的华越 洋GUS染色工作液至完全覆盖材料；锡箔纸包好（整个过程尽量避光）37℃孵育 1-24h。随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时，GUS 活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。注意要做阴性和阳性对照实验。

3．用 70%乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇 1-3h，至阴性对照呈白色，GUS 染色阳性的蓝色斑点很稳定，在酒精中不褪色。如有必要可重复该脱色步骤，以便彻底清除叶绿素。样本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光学显微镜下观察，白色背景上的蓝色即为 GUS 表达位点。

4.观察：肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为 GUS 表达位点。一般染色后，

GUS 染色阳性的蓝色斑点肉眼就能看到。但是有些材料可能蓝色斑点很细微，要在显微镜下才能看到。如果阴性对照显示蓝色，可能是染色时间过长，或者被菌类感染。

GUSblue染色试剂 染色效果参考图：黄瓜子房和拟南芥