X33酵母感受态细胞 高效X33毕赤酵母PEG感受态细胞 化转

X33毕赤酵母PEG感受态细胞


产品货号名称
规格
北京华越洋RC051
X33酵母感受态细胞10×50μl
北京华越洋RC052 X33酵母感受态细胞20×50μl


X33毕赤酵母PEG感受态细胞,X33感受态细胞介绍:


    本试剂盒包括酵母感受态细胞、Solution 1Solution 2。其中酵母感受态细胞是用于转化的细胞,需-80℃低温保存;Solution 1Solution2为转化时使用的试剂,均为无菌,需-20℃保存,使用时解冻即可。本酵母感受态细胞采用专利技术制备的感受态,有别于传统山梨醇制备的感受态细胞,并配有Solution 1Solution 2,可直接用于热击法转化,而不需要使用电转仪和电击杯。本方法是电击法的替代方法,也避免了LiCl方法需要现制备感受细胞的繁琐。转化效率可以达到102-103cfu/ug线性化DNA,经本公司反复验证-80℃保存6个月不影响转化效率。

 

X33毕赤酵母PEG感受态细胞转化步骤

i.            线性化质粒片段的制备

    取过夜培养的质粒菌种3ml,使用质粒抽提试剂盒抽提质粒,最后溶解于50ulTE或水中。将所有的质粒片段在200μl的体系中酶切线性化。用酚氯仿试剂去除蛋白并且浓度片段至20ul体系中(保证有100μg的质粒片段)。

ii.            转化

        1. 直接加于冻结的酵母细胞中,以获得最大转化率; (注意加入至冻结的细胞中,而不是解冻的细胞中);

        2. 加入后迅速放入37℃水浴孵育5min,中间混合样品12次;

        3. 取出离心管,加入1.5ml Solution 1,彻底混匀;(注意可以弹或移液器轻轻混合,不可用移液器剧烈来回混合也不可用涡旋振荡器)

        4. 30℃水浴孵育1h

        5. 室温下2000g离心10min,去除上清液,菌体沉淀重悬于1.5ml Solution 2中;

        6. 离心样品,去除上清液,轻微操作将样品重悬于0.2ml Solution 2中;

        7. 将所有转化液铺于选择性平板(例如MD板),于30℃孵育34天后,鉴定;

 

X33毕赤酵母PEG感受态细胞,X33感受态细胞注意事项

        1.  转化步骤1DNA要加入至冻结的细胞中,注意不可解冻细胞后再加入DNA

        2.  转化步骤2中混合样品是必需的;

        3.   转化步骤3中要充分混匀,但不可剧烈混合;

        4. 所有混合细胞均要轻柔;


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