X33酵母感受态细胞,X33感受态细胞

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X33毕赤酵母PEG感受态细胞

X33毕赤酵母PEG感受态细胞，X33感受态细胞介绍：

    本试剂盒包括酵母感受态细胞、Solution 1和Solution 2。其中酵母感受态细胞是用于转化的细胞，需-80℃低温保存；Solution 1和Solution2为转化时使用的试剂，均为无菌，需-20℃保存，使用时解冻即可。本酵母感受态细胞采用专利技术制备的感受态，有别于传统山梨醇制备的感受态细胞，并配有Solution 1和Solution 2，可直接用于热击法转化，而不需要使用电转仪和电击杯。本方法是电击法的替代方法，也避免了LiCl方法需要现制备感受细胞的繁琐。转化效率可以达到10²-10³cfu/ug线性化DNA，经本公司反复验证-80℃保存6个月不影响转化效率。

X33毕赤酵母PEG感受态细胞转化步骤

i.            线性化质粒片段的制备

    取过夜培养的质粒菌种3ml,使用质粒抽提试剂盒抽提质粒，最后溶解于50ul的TE或水中。将所有的质粒片段在200μl的体系中酶切线性化。用酚氯仿试剂去除蛋白并且浓度片段至20ul体系中（保证有100μg的质粒片段）。

ii.            转化

        1. 直接加于冻结的酵母细胞中，以获得最大转化率； （注意加入至冻结的细胞中，而不是解冻的细胞中）；

        2. 加入后迅速放入37℃水浴孵育5min，中间混合样品1～2次；

        3. 取出离心管，加入1.5ml Solution 1，彻底混匀；(注意可以弹或移液器轻轻混合，不可用移液器剧烈来回混合也不可用涡旋振荡器) ；

        4. 30℃水浴孵育1h；

        5. 室温下2000g离心10min，去除上清液，菌体沉淀重悬于1.5ml Solution 2中；

        6. 离心样品，去除上清液，轻微操作将样品重悬于0.2ml Solution 2中；

        7. 将所有转化液铺于选择性平板（例如MD板），于30℃孵育3～4天后，鉴定；

X33毕赤酵母PEG感受态细胞，X33感受态细胞注意事项

        1.  转化步骤1中DNA要加入至冻结的细胞中，注意不可解冻细胞后再加入DNA；

        2.  转化步骤2中混合样品是必需的；

        3.   转化步骤3中要充分混匀，但不可剧烈混合；

        4. 所有混合细胞均要轻柔；

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