A4感受态细胞

A4感受态细胞

A4 Competent Cell

基因型：

Agrobacterium rhizogenes(kan^R) Ar A4 Ri(agropine type)

产品简介：

       发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜，甘草等），同时具有卡那霉素抗性。本公司生产的A4化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2质粒（壮观霉素抗性）检测，转化效率>10⁴cfu/μg DNA。

操作方法（采用冻融法）：

1.      取-80℃保存的A4发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2.      每100μl感受态加1μg（体积不大于10μl）质粒 DNA，用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3.      冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY 液体培养基，于 28℃振荡培养 2小时。

4.      6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天

TY配方（1L）：

Tryptone          5g

Yeast extract          3g

补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌

配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌

每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。

若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。

注意事项：

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转

化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，

与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获

得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

4. A4具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。

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