Stbl3电转电击感受态细胞

  Stbl3电转电击感受态细胞

       Stbl3 competent cell

Stbl3电转感受态细胞产品规格

Stbl3:   10×50μl

保存条件: -80℃

Stbl3电转感受态细胞基因型

F- glnV44 recA13 mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 xyl-5 leu mtl-1

Stbl3电转感受态细胞产品说明

Stbl3电转感受态细胞来源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低低错误重组的概率。

Stbl3电转感受态细胞操作方法

1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙 醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中 静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19；

B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重 悬，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。

3. 用200 μl枪头(用刀切除12.5px枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5. 立即向电击杯中加入1ml不含抗生素的无菌的华越洋S.O.C. 培养基（室温），用1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管，并用1mlSOC轻柔冲洗电转杯并转移到50ml管中，另外补加3mlSOC培养基，37℃，225 rpm复苏60分钟。

6. 5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的华越洋S.O.C平板上（因菌量较大， 若全部涂板请选用直径375px培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。

Stbl3电转感受态细胞使用注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. Stbl3细胞生长速度快 8-10小时可见克隆。

4. 若用氨苄抗生素筛选，应使用含100 mg/ml ampicillin的平板。

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