T7 Express lysY感受态细胞

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T7 Express lysY Chemically Competent Cell

T7 Express lysY感受态细胞基因型

MiniF lysY (CamR)/fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 ∆(mcrC-mrr)114::IS10 

T7 Express lysY感受态细胞产品说明

T7 Express lysY是BL21菌株的衍生菌株，广泛用于蛋白的原核表达实验。T7 Express lysY是 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型菌株，可促进表达蛋白的稳定。fhuA2突变赋予T7 Express lysY菌株对噬菌体T1的抗性。T7 Express lysY菌株含有 lysY质粒（ lysY质粒具有氯霉素抗性），lysY质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。染色体整合了T7噬菌体RNA聚合酶，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。T7 Express lysY感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1×108 cfu/μg DNA。

T7 Express lysY感受态细胞操作方法

1. T7 Express lysY感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

T7 Express lysY感受态细胞注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

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