YTK12酵母感受态细胞 YTK12菌株

 

YTK12酵母感受态细胞 YTK12酵母菌株

YTK12 Chemically Competent Cell

产品组成：储存条件：-80℃

货号:CR4358

YTK12酵母感受态细胞     10*100ul   

CArrier DNA 10ug/ul      100ul

PEG/LiAC               5ml

YTK12酿酒酵母感受态细胞产品简介：

  YTK12是一个蔗糖酶外泌缺陷型酿酒酵母，该酵母广泛用于分析鉴定分泌蛋白的信号肽。蔗糖酶转化基因suc2能够将棉子糖或蔗糖转化成酵母可以利用的葡萄糖，酵母信号肽追踪系统中使用的pSUC2载体含有蔗糖酶基因suc2，但其为丧失了分泌活性的缺失信号肽序列的基因。YTK12酵母菌株则为suc2基因缺陷型菌种，无法在以棉子糖为单一碳源的YPRAA培养基上正常生长。只有将具有分泌活性的信号肽序列连接在pSUC2载体蔗糖酶基因suc2的N端，转化入YTK12酵母菌株中，才能使蔗糖转化酶正常分泌，YTK12酵母才能将棉子糖转化为葡萄糖，在YPRAA培养基上正常生长。 

YTK12酿酒酵母感受态细胞使用方法：

1. 取YTK12感受态细胞100 µL于冰上融化，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA(95-100℃，5min，快速冰浴，重复一次)10 µL，PEG/LiAc 500 µL并吹打几次混匀，30℃水浴30 min (15min时翻转6-8次混匀)。

2. 将离心管置于42℃水浴15 min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。

3. 5000 rpm离心40 s弃上清，ddH2O 400 µL重悬，离心30s弃上清。

4. ddH2O 50 µL重悬，涂板，29℃培养48-96 h。

YTK12酿酒酵母感受态细胞注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. 酿酒酵母对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm 克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90 h培养可见直径1 mm克隆。

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