土壤 RNA 提取试剂盒
土壤 RNA 提取试剂盒 5.0 版 （含 DNase I）
◆产品编号：ZH001BPLUS，可用一般土壤，淤泥，沙漠土等腐殖酸干扰严重的样品
◆常温运输，避光保存，试剂盒配套的 DNase-20℃ ◆仅限于实验室使用
土壤 RNA 提取试剂盒产品特点：
本试剂盒采用进口硅基质吸附材料和独特的缓冲液体系，用于快速提取各种土壤样本中的总
RNA，适合各种含有腐殖酸、富里酸等 RT-PCR 抑制因子的土壤样本。目前已成功用于堆肥、淤泥、
粪肥、园林土壤、菜地土壤、农作物土壤等样本。
本试剂盒采用独特的缓冲液体系，能高效清除土壤样本中腐殖酸、富里酸、多糖、多酚等 RT-PCR
抑制因子；结合 DNase 柱上消化技术，可以彻底去除基因组 DNA 的污染，保证最终 RNA 的产量
和纯度满足后续实验要求。离心吸附柱采用进口硅基质吸附材料，具有稳定的 RNA 吸附能力和优秀
的均一性，对 RNA 的吸附能力可达 50μg。
土壤 RNA 提取试剂盒规格及组成：
组 成
50 次包装
玻璃珠370mg×50溶液 A135 mL溶液 A2．7 mL×2
溶液 A310 mL
溶液 B15 mL
溶液 C50 mL
RNA 吸附柱50 套
漂洗液50 mL
RNase-free H2O10 mL
Recombinant DNase I (1Μ/μl) 300U（可选）
DNase I Bμffer
2.5 mL（可选）漂洗液50 mL（可选）
漂洗液 RW2
30 mL（可选，与 DNase I 配套使用）
使用手册
1 份
自备试剂、耗材
水饱和酚、氯仿、收集管、5~10ml 离心管
土壤 RNA 提取试剂使用方法：
注意：
溶液 A1 在第一次启用后或长时间不用，需在 4℃条件下存放，用前在 37℃水
浴 10Min.
溶液 A2 在储存过程中可能会产生沉淀。若出现沉淀，经 37℃水浴 10min，使
沉淀彻底溶解，充分摇匀后即可使用。
1. 将 370mg 玻璃珠转入到一个 5~10ml 的塑料离心管中（玻璃珠已分装到 1.5mL 离心管中）。
2. 将 500mg 土壤加入到上述离心管中。
注意：
通常在堆肥、淤泥等样本中含有非常丰富的微生物和其它小型生物（如线虫等），RNA 和
DNA 的含量也会非常高。为保证 RNA 产量和纯度，建议在初次使用时，样本用量不超过 250mg，
后期可以根据实验效果适当调整样本用量。
对于比较贫瘠的土壤（如河道冲积形成的砂土等），由于微生物数量非常少，建议增加样本
用量至 1g 或 2g，同时按比例增加玻璃珠和各个溶液的用量。由于溶液体积变大，在第 12 步时
会增加液体加载的次数，此处也可以使用真空抽滤来代替离心过程，以提高操作效率，具体方
案可以咨询厂家。
3. 将 625μl 溶液 A1 加入到上述离心管中，涡旋混匀。
4. 将 62.5μl 溶液 A2 加入到上述离心管中，涡旋混匀。
5. 将 200μl 溶液 A3 加入到上述离心管中，然后将离心管固定在涡旋仪上，最大转速（3200rpm，
若涡旋仪达不到此速度，可适当延长 5~10min）涡旋连续振荡 5min。
6. 取下离心管，加入 400μl 水饱和酚和 400μl 氯仿，涡旋混匀直至分离层消失。
7. 把离心管固定在涡旋仪上，最大转速（3200rpm，若涡旋仪达不到此速度，可适当延长 5~10min）
涡旋连续振荡 10min。
8. 取下离心管，室温下 2500g 离心 10min。
注意：离心结束后，可以看到 3 个分离层:最下层有机相含有蛋白、细胞碎片；中间层含有腐殖酸及其它有机、无机成份；最上层水相含有 RNA。中间层的厚薄取决于样品类型，富含有机质
的样品会形成更厚的中间层。
9. 离心结束后，小心取下离心管，将上层水相 750μ
（最多不超过900μl）转移到一个干净的 1.5mL
离心管中，加入 1/3 体积的溶液 B，涡旋混匀，冰浴 10min。
注意：离心结束后，在上层水相的液面上仍可能有少量漂浮物（如未完全腐烂的树叶等，漂浮
物的多少与样品类型有关）。尽量避免吸入这种漂浮的杂质，若在吸取上层水相的过程中不慎吸
入少量漂浮物，可以在接下来的冰浴和离心的步骤中去除，并不会对后续操作造成影响。由于
中间层和下层有机相含有细胞碎片、蛋白质和其它有机成份，应避免吸入中间层及下层有机相。
10. 室温 12000 g 离心 3min，转移上清液到一个干净的 2mL 离心管中。离心管底部可能会出现
明显的杂质沉淀，最好留下 50μl 上清液不取。
11. 加入等体积的溶液 C，充分颠倒混匀。
12. 将混合物（每次最多 700μl）加入到一个 RNA 吸附柱中，室温 12000g 离心 1 分钟，弃穿透
液。每个样品一般需加载 3 次。
13. 可选步骤：（膜上消化 DNA）
13.1 加入 700μl 漂洗液，室温 12000g 离心 1 分钟，弃穿透液。
13.2 室温 12000g 离心 2 分钟。此步非常重要，否则残留的乙醇会抑制 DNase 的活性。
13.3 将 5~6μl 的 Recombinant DNase I 加入到 45~44μl DNase I Bμffer 中吹打混匀配制成
DNase I 工作液，然后将 DNase I 工作液加到 RNA 吸附柱的硅胶膜上，室温放置 15～20 分钟。
13.4 加入 600μl 漂洗液 RW2，室温 12000g 离心 1 分钟，弃穿透液。
14. 加入 500μL 漂洗液，室温 12000g 离心 1 分钟，弃穿透液。加入 500μL 漂洗液，重复一遍。
注意：加入 500μl 漂洗液后，盖上盖子上下颠倒数次，可以洗去残留在吸附柱内壁及盖子上的盐。
15. 室温 12000g 离心 2 分钟。此步非常重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
16. 将 RNA 吸附柱转移到 RNase-free 收集管中，加入 50～100μL RNase-free H2O，室温放置 3～
5 分钟。
17. 室温 12000 g 离心 2 分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
18. 如果期望 RNA 产量>30μg，另取 30～50μl RNase-free H2O 重复步骤 13 和 14，合并两次
的洗脱液；也可以将第一次的洗脱液加到 RNA 吸附柱中进行再次洗脱，这样能得到较高浓度的
RNA，但 RNA 产量会比前一种方法低 15～30%，用户根据需要进行选择。19. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA
电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子（BioTechniqμes，28：414，2000）。
20. RNA 产量产率测定：将 5～10 μl RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5～8.2 之间)检测其在 OD260
的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA
的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。
21. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8～2.1 之间(具体数值与其碱
基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响。
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