酿酒酵母感受态制备及转化试剂盒 酵母转化试剂盒
酿酒酵母感受态制备及转化试剂盒
酵母转化试剂盒
CAT:YP7876 size:200T
储存条件：
Carrier DNA -20℃保存，YPD Plus 4℃保存，其他室温保存，有效期 1 年
产品名称 | 规格型号 |
LiAc 感受态制备液 | 30 ml |
PEG/LiAc 转化液 | 100 ml |
Carrier DNA | 1 ml |
YPD Plus（送） | 50 ml |
说明书 | 1 份 |
酵母感受态细胞的制备 ：
1. 活化菌种。-80℃保存的菌种在 YPDA固体培养基上划线，30℃培养 2-4d。
2. 挑取酵母单菌落接种到 3mlYPDA液体培养基中，30℃过夜培养。
3. 第二天转接到含有 30mlYPDA液体培养基的三角瓶中继续培养，等到OD600到 0.5-0.6范围内。收集细胞，4000rpm，离心 5min，去上清。
4. 沉淀用 30-50ml的无菌的去离子水悬浮。4000rpm，离心5min，去上清。
5. 沉淀用 300μl 的 LiAc感受态制备液悬浮。（每 30ml的酵母菌对应 300μl LiAc 感受态制备液，最多不超过 1ml）。把酵母细胞悬浮液分装到 1.5ml 离心管中，每管分装 100μl，用于转化一个质粒即一个反应。感受态细胞应现做现用或于4℃放置不超过 12h。
酵母转化 ：
1. 取一支无菌的 1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒 1-3µg，Carrier DNA 5µl，100µl 冰上融化的感受态细胞，PEG/LiAc 转化液 500µl，轻轻翻转混匀 6-8 次；
2. 30℃水浴 30min，每 10min 轻轻翻转混匀 6-8 次；
3. 每支加入 20µl的二甲基亚砜；
4. 42℃水浴 15min，每 5min轻轻翻转混匀 6-8 次；
5. 12000rpm瞬时离心弃上清，每支加入 1ml的 YPDPlus于 30℃，200rpm复苏 1h；
6. 12000rpm瞬时离心弃上清，用100µl0.9% NaCl重悬，涂板，30℃培养48-96h。
注意事项：
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1. YPDA固体培养基配制时加入 2%的 Agar。
2. 使用Carrier DNA前，请把装有 Carrier DNA的管子在沸水中煮沸 5min， 然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。
3. 全程均要无菌操作。
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