ER2738电转 电击感受态感受态细胞

ER2738电转/电击感受态感受态细胞  

CAT.NO:9877-100E    size：10*100ul

菌株类型:      E.coli

培养基:          LB培养基  生长条件:      37 ℃,  有氧

ER2738电转 电击感受态感受态细胞 基因型:          

F´proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10(TetR)/ fhuA2 glnV Δ(lac-proAB) thi-1 Δ(hsdS-mcrB)5

抗性:  四环素  质粒转化条件:         电转化

ER2738电转 电击感受态感受态细胞 

操作方法 

1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙

醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中

静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的er2738电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)

并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19；

B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重

悬，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。

3. 用200 μl枪头(用刀切除12.5px枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用

电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5. 2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入1ml不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基（室温），用1ml

枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管（BD Falcon 50 ml锥形离心管等），向离心管中

补加S.O.C. 培养基至5 ml,倾斜45度放入摇床，37℃，225 rpm复苏60分钟。

6. 5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上（因菌量较大，

若全部涂板请选用直径375px培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。

ER2738电转 电击感受态感受态细胞
注意事项 

1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。

2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。

3. 当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。

4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

6. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

8. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

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