过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒
过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒
货号hyy9321规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体 100 mL×1 瓶（自备） | 4℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂三 | 液体 12 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
试剂四 | 液体 60 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
标准品 | 液体 1 mL×1 支 | 4℃保存 |
过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒溶液的配制：
1、 试剂一：丙酮自备。
2、 试剂二：临用前加入 6 mL 浓盐酸充分溶解备用，用不完的试剂 4℃保存。
3、 标准品：1mmol/mL H2O2 标准液。
过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒产品说明：
H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。
H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。
技术指标：最低检出限：0.002 μmol/mL
线性范围：0.0097-1.5 μmol/mL
过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、丙酮、浓盐酸、研钵/匀浆器和冰。
过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌、细胞或组织样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织样本的制备：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取全部上清液（注意吸取干净），置冰上待测。
3、血清（浆）样本：按照每 100μL 血清（浆）加入 0.9mL 试剂一的比例充分混匀；8000g 4℃离心 10min， 取全部上清液（注意吸取干净），置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。
2、 将试剂二、三和四37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上
3、 用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为1μmol/mL的标准溶液。
4、 在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称（μL） | 测定管 | 标准管 | 空白管 | |
样本 | 吸取的量为全部上清液 | |||
1umol/mL标准溶液 | 1000 | |||
试剂一 | 1000 | |||
试剂二 | 100 | 100 | 100 | |
试剂三 | 200 | 200 | 200 | |
4000g，常温离心10min，弃上清，留沉淀（可用丙酮清洗3-5次先洗去植物色素） | ||||
试剂四 | 1000 | 1000 | 1000 | |
加入试剂四溶解沉淀，室温静置 5min，倒入比色皿中，415nm 处，蒸馏水调零，记录测定管吸光度。计算∆A
测定=A 测定管-A 空白管，∆A 标准=A 标准管-A 空白管。（空白管只需做 1-2 次即可）
三、H2O2含量计算
1、按照细菌、细胞数量计算：
细菌或细胞中H2O2含量（μmol/104 cell）=∆A测定÷(∆A标准÷C标液)×V样本÷(500×V样本÷V提取)=0.002×∆A测定÷∆A标准
2、按组织质量计算：
组织中H2O2含量（μmol/g 质量）=∆A测定÷(∆A标准÷C标液）×V样本÷(V样本÷V提取×W)=∆A测定÷∆A标准÷W 3、按照蛋白浓度计算：
H2O2含量（μmol/mg prot）=∆A测定÷（∆A标准÷C标液）×V样本÷（Cpr×V样本）=∆A测定÷∆A标准÷Cpr 4、按血清（浆）体积计算：
血清（浆）中H2O2含量（μmol/mL）=∆A测定÷（∆A标准÷C标液）×V样本÷V血清（浆）=10×∆A测定÷∆A标准
500：细胞/细菌个数，以万计；C标液：H2O2标准溶液浓度，1μmol/mL；V样本：加入的样本体积，1mL；W： 组织质量，g；V提取：提取过程中所用体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V血清（浆）：所用血清（浆） 体积，0.1mL。
注意事项：
1、由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。
2、本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。
3、如果样本吸光值大于 0.9，建议将样本用试剂一稀释后进行测定。
实验实例：
1、 取 0.1g 心脏，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取全部上清液（注意吸取干净），置冰上， 按照测定步骤操作，测得计算∆A 测定=A 测定管-A 空白管=0.109-0.003=0.106，∆A 标准=A 标准管-A 空白管
=0.637-0.003=0.634，按样本质量计算含量得：
H2O2 含量（μmol/g 质量）=∆A 测定÷∆A 标准÷W=1.672 μmol/g 质量。
2、 取 0.1g 茶叶，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取全部上清液（注意吸取干净），置冰上， 按照测定步骤操作，测得计算∆A 测定=A 测定管-A 空白管=0.258-0.003=0.255，∆A 标准=A 标准管-A 空白管=0.637-0.003=0.634，按样本质量计算含量得：
H2O2 含量（μmol/g 质量）=∆A 测定÷∆A 标准÷W=4.022 μmol/g 质量。
