丙二醛(MDA)含检测试剂盒
丙二醛(MDA)含检测试剂盒
丙二醛(MDA)含检测试剂盒 可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC0020
规格：50T/48S
丙二醛(MDA)含检测试剂盒
产品内容：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存；
MDA 检测工作液的配制：用时在瓶试剂二中加入 15mL 试剂一，溶解混匀，4℃保存待用。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；
注意事项：
MDA 检测工作液较难溶解，可以 70℃加热，并剧烈振荡以促进溶解。或者通过超声处理以促 进溶解。
产品说明：
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物， 其中包括丙二醛（MDA）。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。
丙二醛（MDA）在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生 成棕红色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2，4-二酮），其最大吸收波长在 532nm。进行比色后可估测 样品中过氧化脂质的含。但是测定动植物组织中 MDA 时受多种物质的干扰，其中最主要的是可 溶性糖，其与 TBA 显色反应产物的最大吸收波长在 450nm，但 532nm 处也有吸收。所以同时测定 600nm、532nm、450nm 下的吸光度，利用 532nm 与 450nm、600nm 下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。
由于植物中受蔗糖干扰较大，动物中受葡萄糖干扰较大，所以本试剂盒有针对蔗糖和葡萄糖的 两个公式。若所测样品为油脂类物质，则两个公式均可。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
丙二醛(MDA)含检测试剂盒操作步骤：
一、MDA 提取：
1.细菌、细胞或组织样品的制备：
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照 400 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声 波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清， 置冰上待测。
2.组织样品的制备：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）：直接检测。
二、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，蒸馏水调零。
混合液在 100℃水浴中保温 30min 后（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，常温， 离心 10min。取上清至 1mL 玻璃比色皿中，测定各样品在 450nm、532nm 和 600nm 处的吸光度。分别计算△A450=A450测定-A450空白，△A532=A532测定-A532空白，△A600=A600测定-A600空白。空白管只需做1-2次。
丙二醛(MDA)含检测试剂盒
三、MDA 含计算：
1.细菌、细胞或动物组织中 MDA 含计算
（1）按照蛋白浓度计算
MDA 含（nmol/ mg prot）=（6.45 ×（△A532-△A600）-1.29×A△450）×V 总÷（Cpr×V 样本） =5×（6.45 ×（△A532-A600）-1.29×△A450）÷Cpr。
（2）按照样品质量计算
MDA 含（nmol/ g 鲜重）=（6.45 ×（△A532--△A600）-1.29×-△A450）×V 总÷（W×V 样本÷V 提取） =5×（6.45 ×（△A532-△A600）-1.29×△A450）÷W。
(3) 按照细菌或细胞密度计算：
MDA 含（nmol/104）=（6.45 ×（△A532-△A600）-1.29×△A450）×V 总÷（400×V 样本÷V 提取） =0.0125×（6.45 ×（△A532-△A600）-1.29×A450）。
（4）按血清（浆）体积计算：
MDA含量（nmol/ml）=（12.9×△A532-△A600）-2.58×△A450)×V总÷V 样本=5×（6.45 ×（△A532-△A600）-1.29×△A450）
V 总：反应体系总体积，1mL；V 样品：加入样品体积，0.2 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。
W：样品质量，g；400：细胞或细菌总数，400 万；V 提取：提取液体积，1mL。
2.植物组织中 MDA 含计算
（1）按照样品质量计算
MDA 含（nmol/ g 鲜重）=（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）×V 总÷（W×V 样本÷V 提取） =5×（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）÷W。
（2）按照蛋白浓度计算
MDA 含（nmol/ mg prot）=（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）×V 总÷（Cpr×V 样本） =5×（6.45 ×（A532-A600）-0.56×A450）÷Cpr。
V 总：反应体系总体积，1mL；V 样品：加入样品体积，0.2 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。
W：样品质，g；V 提取：提取液体积，1mL。
丙二醛(MDA)含检测试剂盒
注意事项：若发现检测样本吸光值过低，可以将沸水浴时间60min调整为90min或者更长，但同一实验中的MDA的检测都需要延长到同一时间以免引起误差。
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