AGL0感受态细胞

           AGL0感受态细胞

AGL-0根癌农杆菌感受态细胞 

基因组：  (C58 pTiBo542) recA::bla (rif R), T-region deleted Mop(+) Cb(R)

AGL0感受态细胞 ： AGL0菌株为C58, RecA型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-DNA，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件， pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。AGL0菌株以28℃有氧的培养方式在LB或YEB上培养，用30%的甘油可保藏菌种。

AGL0感受态细胞 操作方法：

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。 每100ul感受态加1ug（体积不大于10ul）质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

2. 加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。

3. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天（当平板只含有50ug/mlkan时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50ug/ml kan，20ug/ml rif时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif则需要28℃培养72-90h）。

AGL0感受态细胞

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2 混入质粒时应轻柔操作。

3 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量

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