Origami(DE3)感受态细胞

Origami(DE3)感受态细胞

Cat:8Y4O-100ul    size:10*100ul  化学转化

菌株感受态细胞名称: Origami(DE3), Origami DE3, Origami-DE3

菌株类型: E.coli 亮氨酸缺陷型菌株。

培养基: LB培养基

生长条件: 37 ℃,  有氧

基因型: Origami(DE3)感受态细胞菌株基因型

抗性: 卡那，链霉素，四环素

质粒转化条件: 42 ℃热激

应用: 蛋白表达, 含二硫键蛋白表达

诱导方法: IPTG

Origami(DE3)感受态细胞

Origami系列感受态细胞是K-12细胞的衍生而来，在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。研究表明使用Origami系列的感受态细胞表达获得的活性二硫键蛋白比其他同类感受态细胞要多10倍左右。

Origami系列感受态细胞能够用于氨苄抗性质粒的蛋白表达，尤其是和pET32a载体能够完美搭配使用。pET32a载体含有thioredoxin (TRX)融合标签，能够高效提升胞质内蛋白二硫键的形成。

TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性，所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。为了减少细胞内多种分子间的二硫键的形成，含有TrxB和Gor基因突变的宿主菌被建议用于含二硫键正确折叠 蛋白的高效表达。

DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。

Origami(DE3)感受态细胞

操作方法：

1. 取100μl冰上融化的感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心3分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。 

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