血液RNA常温保存液

血液RNA常温保存液

血液RNA常温保存液货号：5563-100ML/5563-500ml

由于血液富含RNase，因此血液RNA（主要是白细胞RNA）非常容易降解，是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。

为解决此问题，开发了本产品，血液RNA常温保存液它具有下列特点:

1. 能快速渗透到新鲜抗凝血液中的有核细胞内（主要是白细胞），抑制RNA分子的降解。保存的血液白细胞RNA常温可放置3天，4°C可放置5天，-20°C可放置3个月。

2. 操作简单，直接将本产品和白细胞样品按比例混合即可。

3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新白细胞，不适用于陈旧血液和冻凝血液，也不适用于禽类血液和其他动物血液。

4. 重复性好，效果跟进口同类产品相当。

血液RNA常温保存液运输及保存常温运输和保存，有效期两年。

自备试剂无。

使用方法注意：RNase污染无处不在，最好用本公司的高效无毒固相RNase清除剂处理RNA工作区域，千万不要使用烷基化试剂DEPC（相当于芥子气）。

一、白细胞的分离和保存

1. 本产品保存全血的效果不好，故不建议用于全血的保存。必须先分离白细胞。

2. 室温1500-2000g离心新鲜血液10-15分钟，最上层为血浆，最下层为红细胞，中间层为膜状的、含白细胞的BuffyCoat（含白细胞多的血液此层可能很厚）。

3. 吸出血浆后，小心将中间的白细胞层吸出（允许污染少量红细胞），按0.5mL白细胞加入到2.5mL（5倍体积）的本产品的比例，将两者混合。

4. 如此保存的白细胞可以在常温（不超过30°C）下放置3天，4°C可放置5天。如果需要-20°C放置，需要先在4°C放置1天，然后在13000g室温离心3分钟，小心吸出浅粉红色的上清液，再将没有液体保存液的白细胞沉淀放置在-20°C，如此可放置3个月。不能直接有液体保存液的白细胞悬浮液放置在-20°C，否则凝固形成的冰晶将会刺破白细胞膜，在凝固的冰晶融化时，白细胞胞浆成分（含RNA）会进入上清，在离心时丢失，离心得到的只是细胞残骸。

5. 使用时，对4°C或以上温度保存的白细胞，将1.5mL本产品和白细胞的混合物转移到离心管中，13000g室温离心3分钟。小心吸出浅粉红色的上清液，沉淀为白细胞，直接用于RNA提取。如果是在-20°C保存的已经按上步方法处理的白细胞沉淀，则直接用于RNA提取。二、提取RNA（本产品不提供RNA提取相关产品）

6. 建议使用Trizol或类似Trizol的动物RNAout（本公司产品）。需要注意的是在加入异丙醇沉淀RNA时，本产品处理的样品由于盐离子浓度高会出现两层（即两相，正常样品会出现RNA沉淀，不会出现两层），小心去除上清，然后加入相当于下层体积2倍的50%的异丙醇，颠倒混匀后13000g室温离心10分钟，RNA将沉淀在管底。再按Trizol的标准操作流程用75%乙醇洗涤沉淀即可。三、RNA的检测（列出步骤仅供参考，本产品不提供相关产品）

7. RNA完整性的电泳检测：强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶中单链RNA分子会自生折叠成各种形状，尤其不能使用DNA上样液，因为没有经过去RNase处理。

8. RNA产量产率测定：将5-10μLRNA用TE缓冲液(pH8.2)稀释10倍后检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2-5ug/mL。

9.RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

血液RNA常温保存液