pUCm-T载体

pUCm-T载体

pUCm-T载体基本信息：

 pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。
 很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片段的重组载体。

pUCm-T载体的主要信息如下：
Basepairs                        2773
Lac Z promoter                    142-171
M13/pUC Sequencing Primer               204-221
LacZ                         222-534
Multiple cloning region                233-376
M13/pUC Reverse Primer                378-395
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region  972-1832
ColE1 origin of replication(rep)           1987-2606

pUCm-T载体图谱：

pUCm-T载体的多克隆位点的详细序列如下(请特别注意其中的Pst I不是单酶切位点)：

   201 ACACAGGAAA   CAGCTATGAC   CATGATTACG   CCAAGCTTGC   ATGCCTGCAG
        TGTGTCCTTT   GTCGATACTG   GTACTAATGC   GGTTCGAACG   TACGGACGTC
              Xba I    Xho I BamH I   Bgl II 
    251 GTCGACTCTA   GACTCGAGGG   ATCCAGATCT   CCAGTCTT GA  CCTGGTCTGC
        CAGCTGAGAT   CTGAGCTCCC   TAGGTCTAGA   GGTCAGA TCT  GGACCAGACG
        Pst INot I      Nco I EcoR V  Cla I   Nde I         T7 promoter
    301 AGGCGGCCGC   CCATGGGATA   TCATCGATCA   TATGTCGCCC   TATAGTGAGT
        TCCGCCGGCG   GGTACCCTAT   AGTAGCTAGT   ATACAGCGGG   ATATCACTCA
                 Kpn I   Sac I    EcoR I 
    351 CGTATTACGG   TACCGAGCTC   GAATTCACTG   GCCGTCGTTT   TACAACGTCG
        GCATAATGCC   ATGGCTCGAG   CTTAAGTGAC   CGGCAGCAAA   ATGTTGCAGC
 

pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：
    Afl II    Age I    Apa I       Asc I     Avr II      Bbs I      Bbv II    Bcl I
    Blp I     BsaA I   BseR I      Bsg I     BsiC I      BsiW I     Bsm I     BsmF I 
    Bsp120 I  BspM II  BsrG I      BssH II   Bst1107 I   BstB I     BstE II   BstX I
    Bsu36 I   Dra III  Eco47 III   Eco72 I   Esp I       Fse I      Hpa I     Mlu I
    Msc I     Mun I    Nae I       NgoM I    Nhe I       Nru I      Nsi I     PflM I
    Pme I     Pml I    PpuM I      PspA I    Rsr II      Sac II     Sfi I     Sma I
    SnaB I    Spe I    Spl I       Srf I     Stu I       Xca I      Xma I
    

pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：

 pUCm-T载体的全序列信息：

    pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成，除多克隆位点外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number M77789)。
    少量自连的载体转化得到的克隆由于编码了LacZ基因，而在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色。大部分重组的载体，由于插入片段破坏了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上转化得到白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆。
      pUCm-T载体和PCR产物片段进行连接，转化后在IPTG/X-Gal平板的上长出的克隆，其中白色克隆代表PCR产物片段可能插入到pUCm-T载体中，但后续还需要酶切、PCR或者测序确认。
    对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定，也可以使用廉价且高效的EcoRI、BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。
    构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。
    构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录，用于探针标记等。
    一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。

pUCm-T载体保存条件： -20℃保存。

pUCm-T载体注意事项：

  DNA聚合酶是否可以在PCR产物3’端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况，不适合用于T载体的连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3’端加A的反应，再用T载体进行克隆。
    进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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