BL21 感受态细胞

BL21 感受态细胞

BL21 Chemically Competent Cell

BL21感受态细胞基因型：

E. coli B F- dcm ompT hsdS(r_B^- m_B^-) gal [malB⁺]_K-12(λ^S)

BL21感受态细胞说明：

BL21是最早开发的用于原核表达的菌株，BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表达菌株均来源于BL21菌株。该菌株主要用于非毒性蛋白的表达，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达(如：pET系列)；但含有大肠杆菌RNA聚合酶，可以用于tac或trc等使用大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达（如：pGEX，pMAL质粒）。BL21感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达10⁷cfu/µg DNA。

BL21感受态细胞操作方法：

1.   BL21感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2.   42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.   向离心管中加入700ul不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4.   5000 rpm离心一分钟收菌，留取100ul左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.   将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

BL21感受态细胞注意事项：

1.   感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2.   混入质粒时应轻柔操作。

3.   转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.   诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2 mM均可）。

5.   为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

BL21感受态细胞保存条件： -80℃

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