DNA去磷酸化试剂盒

DNA去磷酸化试剂盒

DNA去磷酸化试剂盒，DNA去磷酸化试剂

产品及特点   分子克隆时，载体的自连极大降低了连接效率，而对载体DNA两个5′端的-PO4基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。此外在进行DNA或RNA5′端标记前，也需要将其本来的-PO4基团去除再加上标记基团。本公司开发的DNA去磷酸化产品就是针对这一目的而开发。

DNA去磷酸化试剂盒，DNA去磷酸化试剂

它具有下列特点：

1.    基于细菌碱性磷酸酶，反应在较高温度进行，效率更高。

2.    把DNA和RNA 5′端的-PO4基团变成-OH基团，丧失连接能力。

3.    模板可以是单链，也可以是双链，既可以是DNA，也可以是RNA。

4.    处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。

5.    本产品足够20次去磷酸化实验。

DNA去磷酸化试剂盒，DNA去磷酸化试剂

规格及成分        成  份         塑料包装

10×去磷酸缓冲液      100 μL

细菌碱性磷酸酶（0.5U/μL）   50 μL

超纯水                1 mL

DNA去磷酸化试剂盒，DNA去磷酸化试剂

运输及保存   低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。

自备试剂       核酸片段

使用方法       注意：dNTP和ATP也是碱性磷酸酶的底物，所以如果核酸溶液中有dNTP和ATP，一定要先将其去除。否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶，降低DNA去磷酸化效率。

1、  在微量离心管中配制下列反应液（50μL）：

成  分          用  量

DNA片段     不超过10 pmol

10×去磷酸缓冲液      5 μL

细菌碱性磷酸酶   2.5 μL

超纯水到            50 μL

2、  65℃反应30分钟。如果是RNA样品，建议在37℃反应30分钟。

3、  酚氯仿抽提去除酶活性，乙醇沉淀DNA待用（见附）。

附：酚/氯仿抽提DNA、乙醇沉淀浓缩DNA(本试剂盒不提供相关试剂，需要从华越洋另购相关试剂，下列操作仅供参考)：

1、  在50 uL DNA溶液中加入50 uL超纯水增加体积，以免纯化过程中DNA丢失。如果有必须，可以加入和4uL核酸助沉剂提高回收效率。

2、  加入100uL酚/氯仿/异戊醇25：24：1混合液震荡半分钟混匀，室温12000g离心3分钟，转移上清到新离心管中。

3、  重复上步操作一次。

4、  加0.1倍体积（即10uL）的3 M 乙酸钠溶液（pH 5.2）。

5、  再加入2.5倍体积（即250uL）的无水乙醇。

6、  混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。

7、  加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。

8、  短暂离心5秒，吸弃残留液体（约30-50uL）。

9、  室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

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