鬼笔环肽

            鬼笔环肽（phalloidin 鬼笔鹅膏素）

   鬼笔环肽从一种毒性菇类中分离的剧毒生物碱，C35H48N8O11S。无色，细针状结晶，系从毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）中得到的有毒的环状七肽。与鹅膏蕈碱（amanitin）一起存在，毒性比鹅膏蕈碱弱，对小鼠的致死剂量是50微克，对人体也有很强的毒性，可引起流涎、呕吐、便血、发绀、痉挛、肌肉挛缩，以致死亡。它同细胞松弛素Ｂ的作用相反, 只与聚合的微丝结合, 而不与肌动蛋白单体分子结合。它同聚合的微丝结合后, 抑制了微丝的解体, 因而破坏了微丝的聚合和解聚的动态平衡。鬼笔环肽可以与聚合的微丝结合的特殊性质使得它具有一个颇富前景的用途：通过让这种毒素吸附于荧光染料上面，研究人员可以研究细胞的内部工作机制，窥视细胞如何分裂。通过这些观察，他们可以揭开癌症工作机制和组织生长之谜。
美国加州大学圣克鲁斯分校的两位化学家斯科特·洛基和劳拉·舒利斯科(Laura Schuresko)利用一种称为固相合成(solid-phase synthesis)的手法，制造出这种致命物质。他们不是将几种化学物质放入烧瓶混合，让它们自由飘浮，而是在化学反应期间对其中一种化学物质进行适当约束，这样一来，研究人员在复杂的化学反应过程中可以更好地对其进行控制。
FITC和Rhodamin等荧光物质标记的鬼笔环肽可特异的与真核细胞的F-actin结合，从而显示微丝骨架在细胞中的分布。鬼笔环肽的配制：0.1mg鬼笔环肽溶于1ml无水甲醇（也可用DMSO或无水乙醇溶解）配成贮存液，可在-20度避光的条件下长期保存，工作液的浓度为5ug/ml，由贮存液加生理盐水PBS稀释20倍即可。
染色程序：生理盐水PBS清洗细胞2次，每次10分钟；3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分钟，生理盐水PBS清洗细胞2次；加入5ug/ml的FITC-鬼笔环肽室温染色30-60分钟，夏季时间可以短一些，生理盐水PBS清洗细胞2次；DAPI或hoechst33258染细胞核10分钟，生理盐水PBS清洗细胞2次；吸去多余水分，加荧光封片液（中性或偏碱性缓冲液加等量甘油），盖上盖玻片，荧光或共聚焦显微镜下观察。
注意事项： 鬼笔环肽的分子量小，很容易通过细胞，不需要对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理。毒性较大，戴上手套操作。
 

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