酵母转化试剂盒

酵母转化试剂盒

酵母转化试剂盒酵母感受态细胞的制备：

1. 活化菌种。把-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基上划线，在30 ℃培养2-4天。

2. 挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线，在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时，接种。

3. 首先把酵母细胞接种到3 ml液体YPDA培养基中，30 ℃过夜培养。

4. 第二天转接到含有30 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞，1000 g，离心5 min, 去上清。

5. 沉淀用30-50 ml的无菌的去离子水悬浮。1000 g，离心5 min，去上清。

6. 沉淀用合适体积的100 mM LiAc悬浮（30 ml的酵母菌最多用不超过1 ml的100 mM LiAc悬浮，通常100 μl的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应）。

7. 把酵母细胞的悬浮液分装到1.5 ml的离心管中，每管分装100 μl，用于转化一个质粒即一个反应。1000 g，离心5 min，去上清。制备好的感受态细胞备用。

酵母转化试剂盒注意事项：

1. 初次使用 Carrier DNA，请把装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮沸 5 min，然后立即放在冰上，用后放

在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻 Carrier DNA。

2. PEG 溶液在低温环境下会析出，请于常温环境下完全溶解后使用。

3. 转化全程要无菌操作。

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