pTrcHisC
pTrcHisC
编号 | 载体名称 |
北京华越洋VECT90147 | pTrcHisC |
pTrcHisC载体基本信息：
启动子: | Trc/lac |
复制子: | PBR322 ori |
终止子: | rrnB TT |
质粒分类: | 大肠杆菌载体；pTrc系列表达质粒 |
质粒大小: | 4412bp |
质粒标签: | N-His，N-EK |
原核抗性: | 氨苄青霉素Amp |
克隆菌株: | DH5α |
培养条件: | 37℃，有氧，LB |
表达宿主: | 大肠杆菌 |
诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
5'测序引物: | pTrcHis-F: GAGGTATATATTAATGTATCG |
3'测序引物: | pTrcHis-R:GATTTAATCTGTATCAGG |
备注: | pTrc表达质粒 |
pTrcHisC载体质粒图谱和多克隆位点信息:
pTrcHisC载体简介：
pTrcHis载体是来由pBR322质粒衍生而来的表达载体,设计用来在大肠杆菌中进行重组蛋白的高效表达和纯化。
载体上的Trc启动子和rrnB抗终止区使得高水平蛋白表达成为可能.Trc启动子由Trp启动子的-35区域和Lac启动子的-10区域共同组成。pTrcHis载体同时包含有一个LacIq基因，该基因编码了Lac启动子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+还是LacIq-都可以高效抑制插入基因的转录。
进行蛋白表达时，大肠杆菌需要生长到对数生长期，然后加入1mM IPTG，去除阻遏蛋白，诱导表达。载体上的迷你顺反子结构能够增强插入基因的转录水平，从而高水平表达目的蛋白。DNA插入片段位于载体表达片段下游，在其上游有一个N-端融合表达多肽序列，该序列包含有ATG起始密码子，6xHis标签，T7噬菌体10号基因的翻译增强子，X press抗原表位，肠激酶酶切识别位点。
pTrcHisC载体序列:
ORIGIN
1 GTTTGACAGC TTATCATCGA CTGCACGGTG CACCAATGCT TCTGGCGTCA GGCAGCCATC
61 GGAAGCTGTG GTATGGCTGT GCAGGTCGTA AATCACTGCA TAATTCGTGT CGCTCAAGGC
121 GCACTCCCGT TCTGGATAAT GTTTTTTGCG CCGACATCAT AACGGTTCTG GCAAATATTC
181 TGAAATGAGC TGTTGACAAT TAATCATCCG GCTCGTATAA TGTGTGGAAT TGTGAGCGGA
241 TAACAATTTC ACACAGGAAA CAGCGCCGCT GAGAAAAAGC GAAGCGGCAC TGCTCTTTAA
301 CAATTTATCA GACAATCTGT GTGGGCACTC GACCGGAATT ATCGATTAAC TTTATTATTA
361 AAAATTAAAG AGGTATATAT TAATGTATCG ATTAAATAAG GAGGAATAAA CCATGGGGGG
421 TTCTCATCAT CATCATCATC ATGGTATGGC TAGCATGACT GGTGGACAGC AAATGGGTCG
481 GGATCTGTAC GACGATGACG ATAAGGATCG ATGGATCCGA CCTCGAGATC TGCAGATGGT
541 ACCATATGGG AATTCGAAGC TTGGCTGTTT TGGCGGATGA GAGAAGATTT TCAGCCTGAT
601 ACAGATTAAA TCAGAACGCA GAAGCGGTCT GATAAAACAG AATTTGCCTG GCGGCAGTAG
661 CGCGGTGGTC CCACCTGACC CCATGCCGAA CTCAGAAGTG AAACGCCGTA GCGCCGATGG
721 TAGTGTGGGG TCTCCCCATG CGAGAGTAGG GAACTGCCAG GCATCAAATA AAACGAAAGG
781 CTCAGTCGAA AGACTGGGCC TTTCGTTTTA TCTGTTGTTT GTCGGTGAAC GCTCTCCTGA
841 GTAGGACAAA TCCGCCGGGA GCGGATTTGA ACGTTGCGAA GCAACGGCCC GGAGGGTGGC
901 GGGCAGGACG CCCGCCATAA ACTGCCAGGC ATCAAATTAA GCAGAAGGCC ATCCTGACGG
961 ATGGCCTTTT TGCGTTTCTA CAAACTCTTT TTGTTTATTT TTCTAAATAC ATTCAAATAT
1021 GTATCCGCTC ATGAGACAAT AACCCTGATA AATGCTTCAA TAATATTGAA AAAGGAAGAG
1081 TATGAGTATT CAACATTTCC GTGTCGCCCT TATTCCCTTT TTTGCGGCAT TTTGCCTTCC
1141 TGTTTTTGCT CACCCAGAAA CGCTGGTGAA AGTAAAAGAT GCTGAAGATC AGTTGGGTGC
1201 ACGAGTGGGT TACATCGAAC TGGATCTCAA CAGCGGTAAG ATCCTTGAGA GTTTTCGCCC
1261 CGAAGAACGT TTTCCAATGA TGAGCACTTT TAAAGTTCTG CTATGTGGCG CGGTATTATC
1321 CCGTGTTGAC GCCGGGCAAG AGCAACTCGG TCGCCGCATA CACTATTCTC AGAATGACTT
1381 GGTTGAGTAC TCACCAGTCA CAGAAAAGCA TCTTACGGAT GGCATGACAG TAAGAGAATT
1441 ATGCAGTGCT GCCATAACCA TGAGTGATAA CACTGCGGCC AACTTACTTC TGACAACGAT
1501 CGGAGGACCG AAGGAGCTAA CCGCTTTTTT GCACAACATG GGGGATCATG TAACTCGCCT
1561 TGATCGTTGG GAACCGGAGC TGAATGAAGC CATACCAAAC GACGAGCGTG ACACCACGAT
1621 GCCTGTAGCA ATGGCAACAA CGTTGCGCAA ACTATTAACT GGCGAACTAC TTACTCTAGC
1681 TTCCCGGCAA CAATTAATAG ACTGGATGGA GGCGGATAAA GTTGCAGGAC CACTTCTGCG
1741 CTCGGCCCTT CCGGCTGGCT GGTTTATTGC TGATAAATCT GGAGCCGGTG AGCGTGGGTC
1801 TCGCGGTATC ATTGCAGCAC TGGGGCCAGA TGGTAAGCCC TCCCGTATCG TAGTTATCTA
1861 CACGACGGGG AGTCAGGCAA CTATGGATGA ACGAAATAGA CAGATCGCTG AGATAGGTGC
1921 CTCACTGATT AAGCATTGGT AACTGTCAGA CCAAGTTTAC TCATATATAC TTTAGATTGA
1981 TTTAAAACTT CATTTTTAAT TTAAAAGGAT CTAGGTGAAG ATCCTTTTTG ATAATCTCAT
2041 GACCAAAATC CCTTAACGTG AGTTTTCGTT CCACTGAGCG TCAGACCCCG TAGAAAAGAT
2101 CAAAGGATCT TCTTGAGATC CTTTTTTTCT GCGCGTAATC TGCTGCTTGC AAACAAAAAA
2161 ACCACCGCTA CCAGCGGTGG TTTGTTTGCC GGATCAAGAG CTACCAACTC TTTTTCCGAA
2221 GGTAACTGGC TTCAGCAGAG CGCAGATACC AAATACTGTC CTTCTAGTGT AGCCGTAGTT
2281 AGGCCACCAC TTCAAGAACT CTGTAGCACC GCCTACATAC CTCGCTCTGC TAATCCTGTT
2341 ACCAGTGGCT GCTGCCAGTG GCGATAAGTC GTGTCTTACC GGGTTGGACT CAAGACGATA
2401 GTTACCGGAT AAGGCGCAGC GGTCGGGCTG AACGGGGGGT TCGTGCACAC AGCCCAGCTT
2461 GGAGCGAACG ACCTACACCG AACTGAGATA CCTACAGCGT GAGCTATGAG AAAGCGCCAC
2521 GCTTCCCGAA GGGAGAAAGG CGGACAGGTA TCCGGTAAGC GGCAGGGTCG GAACAGGAGA
2581 GCGCACGAGG GAGCTTCCAG GGGGAAACGC CTGGTATCTT TATAGTCCTG TCGGGTTTCG
2641 CCACCTCTGA CTTGAGCGTC GATTTTTGTG ATGCTCGTCA GGGGGGCGGA GCCTATGGAA
2701 AAACGCCAGC AACGCGGCCT TTTTACGGTT CCTGGCCTTT TGCTGGCCTT TTGCTCACAT
2761 GTTCTTTCCT GCGTTATCCC CTGATTCTGT GGATAACCGT ATTACCGCCT TTGAGTGAGC
2821 TGATACCGCT CGCCGCAGCC GAACGACCGA GCGCAGCGAG TCAGTGAGCG AGGAAGCGGA
2881 AGAGCGCCTG ATGCGGTATT TTCTCCTTAC GCATCTGTGC GGTATTTCAC ACCGCATATG
2941 GTGCACTCTC AGTACAATCT GCTCTGATGC CGCATAGTTA AGCCAGTATA CACTCCGCTA
3001 TCGCTACGTG ACTGGGTCAT GGCTGCGCCC CGACACCCGC CAACACCCGC TGACGCGCCC
3061 TGACGGGCTT GTCTGCTCCC GGCATCCGCT TACAGACAAG CTGTGACCGT CTCCGGGAGC
3121 TGCATGTGTC AGAGGTTTTC ACCGTCATCA CCGAAACGCG CGAGGCAGCA GATCAATTCG
3181 CGCGCGAAGG CGAAGCGGCA TGCATTTACG TTGACACCAT CGAATGGCGC AAAACCTTTC
3241 GCGGTATGGC ATGATAGCGC CCGGAAGAGA GTCAATTCAG GGTGGTGAAT GTGAAACCAG
3301 TAACGTTATA CGATGTCGCA GAGTATGCCG GTGTCTCTTA TCAGACCGTT TCCCGCGTGG
3361 TGAACCAGGC CAGCCACGTT TCTGCGAAAA CGCGGGAAAA AGTGGAAGCG GCGATGGCGG
3421 AGCTGAATTA CATTCCCAAC CGCGTGGCAC AACAACTGGC GGGCAAACAG TCGTTGCTGA
3481 TTGGCGTTGC CACCTCCAGT CTGGCCCTGC ACGCGCCGTC GCAAATTGTC GCGGCGATTA
3541 AATCTCGCGC CGATCAACTG GGTGCCAGCG TGGTGGTGTC GATGGTAGAA CGAAGCGGCG
3601 TCGAAGCCTG TAAAGCGGCG GTGCACAATC TTCTCGCGCA ACGCGTCAGT GGGCTGATCA
3661 TTAACTATCC GCTGGATGAC CAGGATGCCA TTGCTGTGGA AGCTGCCTGC ACTAATGTTC
3721 CGGCGTTATT TCTTGATGTC TCTGACCAGA CACCCATCAA CAGTATTATT TTCTCCCATG
3781 AAGACGGTAC GCGACTGGGC GTGGAGCATC TGGTCGCATT GGGTCACCAG CAAATCGCGC
3841 TGTTAGCGGG CCCATTAAGT TCTGTCTCGG CGCGTCTGCG TCTGGCTGGC TGGCATAAAT
3901 ATCTCACTCG CAATCAAATT CAGCCGATAG CGGAACGGGA AGGCGACTGG AGTGCCATGT
3961 CCGGTTTTCA ACAAACCATG CAAATGCTGA ATGAGGGCAT CGTTCCCACT GCGATGCTGG
4021 TTGCCAACGA TCAGATGGCG CTGGGCGCAA TGCGCGCCAT TACCGAGTCC GGGCTGCGCG
4081 TTGGTGCGGA TATCTCGGTA GTGGGATACG ACGATACCGA AGACAGCTCA TGTTATATCC
4141 CGCCGTCAAC CACCATCAAA CAGGATTTTC GCCTGCTGGG GCAAACCAGC GTGGACCGCT
4201 TGCTGCAACT CTCTCAGGGC CAGGCGGTGA AGGGCAATCA GCTGTTGCCC GTCTCACTGG
4261 TGAAAAGAAA AACCACCCTG GCGCCCAATA CGCAAACCGC CTCTCCCCGC GCGTTGGCCG
4321 ATTCATTAAT GCAGCTGGCA CGACAGGTTT CCCGACTGGA AAGCGGGCAG TGAGCGCAAC
4381 GCAATTAATG TGAGTTAGCG CGAATTGATC TG
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