Y2Hgold酵母双杂交菌株

Y2Hgold酵母双杂交菌株

产品信息：

        名称：Y2Hgold酵母双杂交菌株

         规格：300ul甘油菌

 储存温度：-80℃

基因组：

        MATa,trp1-901,leu2-3,112,ura3-52,his3-200,gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS–Gal1TATA–His3,GAL2UAS–Gal2TATA–Ade2URA3: :MEL1UAS–Mel1TATA  AUR1-C MEL1

产品简介：

Y2HGold菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation  marker为: trp1, leu2，报告基因为：AbAr, HIS3, ADE2, MEL1。Y2HGold -GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C端768 ~881 位氨基酸)与目标蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1 ~ 174位氨基酸区段的DNA结合域（DNA-BD）和位于C端768 ~881 位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成 bait 融合蛋白（bait -BD）和 prey 融合蛋白（prey-AD），如果 bait 和 prey发生相互作用，就会促使 BD 和 AD 的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y2HGold有四个报告基因：AbAr, HIS3, ADE2, MEL1，分别由三种不同的启动子（G1，G2，M1）启动，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。此外新报告基因AbAr与以前的营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，也可以降低酵母双杂假阳性发生的概率。Y2HGold需在28℃有氧的条件下,使用YPDA培养基培养，然后使用30%的甘油保藏菌种。

操作说明：

1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。

2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

冷冻管开封：

用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。

菌株复溶：

无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。

菌株复壮：

用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌在30-35℃培养箱中培养24-48h，真菌在23-28℃培养箱中培养24-72h（必要时，可适当延长培养时间）。

菌株传代：

将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。

注意事项：

1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放置会导致菌种衰退；

2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；

3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长；

4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问；

5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态；

6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%CO₂ 促进生长；

7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。

8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。

保藏条件：

-20℃保存（复溶液于2-8℃保存）

保藏时间：

2-10 年，应根据菌种状况及时转接

其他菌株：