BL21 trxB(DE3)plyss感受态细胞

BL21 trxB(DE3)plyss感受态细胞

              BL21 trxB(DE3)plyss

编号WG17230S

名称BL21 trxB(DE3)plyss感受态细胞

规格10×100ul

菌株类型:E.coli

培养基:LB培养基

生长条件:

37 ℃, 有氧

抗性:卡那霉素,氯霉素

应用:蛋白表达

质粒转化条件：42 ℃热激

诱导方法:IPTG

菌株特点: 

1. BL21 trxB(DE3)plyss感受态细胞菌株是常用的目的蛋白表达菌株，该菌株有利于目的蛋白二硫键在细胞质中的形成，能有效提高含二硫键蛋白的正确折叠和表达。

2. BL21trxB宿主菌拥有与AD494菌株相同的硫氧还蛋白还原酶突变体（thioredoxin reductase mutation，TrxB）突变体。该菌株来源于BL21菌株。由于含有trxB蛋白的宿主菌能够有效提高细胞质内二硫键形成，他们能够提高目的蛋白的正确折叠率。该宿主菌具有卡那霉素抗性，所以这个菌株只能用于氨苄霉素抗性的质粒表达。

3. DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。

4  含有pLSs质粒，pLySs质粒能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。

BL21 trxB(DE3)plyss感受态细胞操作方法：

1. 取100μl冰上融化的BL21（DE3）感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。 

BL21 trxB(DE3)plyss感受态细胞注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

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