Rosetta-gami (DE3) pLysS 感受态细胞

         Rosetta-gami (DE3) pLysS 感受态细胞

        Rosetta-gami (DE3) pLysS Competent Cells

菌株概述Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLysS RARE (CamR, KanR, StrR, TetR)

Rosetta-gami (DE3) pLysS感受态细胞经特殊工艺制作，可用于DNA的化学转化。Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞同时具有氯霉素，卡那，链霉素和四环素四种抗生素抗性。

特点

Rosetta-gami系列菌株来源于Origami系列宿主菌，该系列菌株的优点除了含有Origami菌株原有的TrxB和Gor基因突变，提高含二硫键正确折叠蛋白的高效表达，同时含有Rosetta系列菌株中含有的真核细胞稀有密码子。该菌株同时集合了Origami (DE3)和Rosetta (DE3)的优点。Rosetta-gami (DE3) pLysS系列菌株含有pRARE质粒，能够提供AUA，AGG，AGA，CUA，CCC和GGA六个真核细胞中的稀有密码子tRNA，能够有效提升真核细胞在大肠杆菌中的蛋白表达水平。

应用

该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。当使用pCDF系列载体时，还需要使用壮观霉素(Spectinomycin)进行筛选。

操作步骤：

1将感受态细胞置于冰水浴中化冻。等细胞刚化冻后，加入目的DNA到感受态中，用手指拨打管底，轻轻混匀，一般加入的质粒体积不要超过感受态的10分之一体积。

2冰水浴中放置30分钟，不要晃动。

3 42℃热击60秒钟，不要晃动。

4冰水浴中放置2分钟，不要晃动。

5加入500ul无菌的SOC或者LB培养基。

6置于30℃摇床中，150-200rpm，复苏培养60分钟。

7取适量菌液涂布在含有抗性的LB平板上，待液体吸干后，倒置平板30℃培养12-24时候。

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