PIR1 PIR2感受态细胞

                  PIR1 PIR2 感受态细胞  化转 电转

PIR1 PIR2 感受态细胞

操作方法

1.感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入0.9 mL 室温SOC培养基，使用其他培养基会降低转化效率。

4. 30℃，225 rpm复苏90分钟。 （当质粒中含有不稳定片段时， 30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control PUC19 计算转化效率，则需37℃， 225 rpm复苏60分钟。）

5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的SOC培养基上。

6.将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。（若转化control PUC19 计算转化效率，则需37℃培养过夜）

感受态细胞 使用注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.若用氨苄抗生素筛选，应使用含100 μg/ml ampicillin的平板。

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