BJ5183电转电击感受态细胞

            BJ5183电转电击感受态细胞

名称:BJ5183电转电击感受态细胞

培养基: LB培养基 

生长条件: 37 ℃, 有氧 

基因型: endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR(Strr) 

BJ5183电转电击感受态细胞

抗性: 链霉素 

质粒转化条件: 42 ℃热激 

应用: 腺病毒重组菌株 

BJ5183电转电击感受态细胞菌株特点: 

BJ5183感受态细胞是高效重组li菌株。该宿主菌能够将含有同源序列的两个质粒， 一个是含有目的基因 的转移载体，另一个是含有腺病毒基因组的腺病毒载体，通过菌株中含有的重组组件和两个质粒上的同源序列，将这两个质粒进行重组。

BJ5183电转电击感受态细胞使用步骤：

1. 电极间距为 2.5px 的电转杯插入碎冰中，压实冰面，冰中静置 5 分钟，使电转杯充分降温。（电转杯重复使用方法：每次用完后，用大量的自来水冲洗干净去掉菌液和 DNA，用蒸馏水洗 3 遍，将其泡在 75%乙醇中 30 分钟，取出杯子，沥干液体，放在超净台中，使乙醇充分挥发，盖上盖子放干燥地方备用）。

2. 取-70℃保存的感受态细胞插入冰中，待细胞刚化冻后，加入质粒 DNA 或连接产物（洗脱或溶解质粒的溶液中离子不能太高，或用双蒸水稀释，对照 pUC19 可以用无菌水稀释到 10pg/μl），用手指拨打管底轻轻混匀，立即插入冰中，在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA 混合物快速转移到电击杯中，避免产生气泡，确保细胞沉到杯底，盖上杯盖，空管保留待用。

3. 启动电转仪，设置电击参数: 2.0 kV，200Ω，25μF（BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）。用纸巾擦掉电转杯外部的水分，将电转杯放入电转槽中进行电击。完成后，将电转杯插入冰中，加入950μl无抗生素的SOC或LB培养基，并将液体转移到原来保留的感受态空管中，37℃，150-250rpm振荡培养1小时。

4. 取 100-200μl 左右的菌液或稀释后的菌液，涂布于含相应抗生素的 LB 平板上，倒置放于 37℃培养箱培养 12-18 小时。

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