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酿酒酵母感受态制备及转化试剂盒 酵母转化试剂盒

酿酒酵母感受态制备及转化试剂盒@@@ 酵母转化试剂盒

酿酒酵母感受态制备及转化试剂盒

    酵母转化试剂盒

 CAT:YP7876  size:200T

储存条件:

Carrier DNA -20保存,YPD Plus 4保存,其他室温保存,有效期 1 

 

产品名称

规格型号

LiAc 感受态制备液

30 ml

PEG/LiAc 转化液

100 ml

Carrier DNA

1 ml

YPD Plus(送)

50 ml

说明书

1

酵母感受态细胞的制备

1. 活化菌种。-80℃保存的菌种在 YPDA固体培养基上划线,30℃培养 2-4d。

 

2. 挑取酵母单菌落接种到 3mlYPDA液体培养基中,30℃过夜培养。


3. 第二天转接到含有 30mlYPDA液体培养基的三角瓶中继续培养,等到OD600 0.5-0.6范围内。收集细胞,4000rpm,离心 5min,去上清。

 

4. 沉淀用 30-50ml的无菌的去离子水悬浮。4000rpm,离心5min,去上清。

 

5. 沉淀用 300μl  LiAc感受态制备液悬浮。( 30ml的酵母菌对应 300μl LiAc 感受态制备液,最多不超过 1ml)。把酵母细胞悬浮液分装到 1.5ml 离心管中,每管分装 100μl,用于转化一个质粒即一个反应。感受态细胞应现做现用或于4℃放置不超过 12h。

酵母转化

1.  取一支无菌的 1.5ml EP管,依次加入预冷的目的质粒 1-3µg,Carrier DNA 5µl,100µl 冰上融化的感受态细胞,PEG/LiAc 转化液 500µl,轻轻翻转混 6-8 次;

2. 30℃水浴 30min,每 10min 轻轻翻转混匀 6-8 次;


3. 每支加入 20µl的二甲基亚砜;

 

4. 42℃水浴 15min,每 5min轻轻翻转混匀 6-8 次;

 

5. 12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入 1ml YPDPlus于 30℃,200rpm复苏 1h;

 

6. 12000rpm瞬时离心弃上清,用100µl0.9% NaCl重悬,涂板,30℃培养48-96h。

注意事项:

酿酒酵母感受态制备及转化试剂盒

    酵母转化试剂盒

1. YPDA固体培养基配制时加入 2% Agar。

2. 使用Carrier DNA前,请把装有 Carrier DNA的管子在沸水中煮沸 5min, 然后立即放在冰上,用后放在-20℃储存备用。

3. 全程均要无菌操作

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    酵母转化试剂盒