ArcticExpress(DE3)RP化学感受态细胞

ArcticExpress(DE3)RP化学感受态细胞

ArcticExpress(DE3)RP Chemically Competent Cell

ArcticExpress(DE3)RP化学感受态细胞基本信息：

ArcticExpress(DE3)RP基因型:

E. coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte [cpn10 cpn60 Gentr] [argU proL Strr]

ArcticExpress(DE3)RP菌株介绍：

ArcticExpress细胞可以解决细菌基因表达中常见的蛋白质不溶解障碍。这些细胞衍生自高性能BL21-Gold感受态细胞，使异源蛋白质在大肠杆菌中高效高水平地表达。

在大肠杆菌中异源蛋白的强行高水平表达可导致大量不正确折叠蛋白质的产生，出现被称为包涵体的无活性蛋白聚集体。而聚集蛋白可能很容易纯化，要从包涵体得到活性蛋白质通常需要蛋白特异性和劳动密集型的体外重折叠步骤，同时也不保证获产物具有生物活性。通过ArcticExpress系列感受态细胞提供的体内方法可以提高在大肠杆菌中可溶性蛋白质的产率。

在标准培养温度下嗜温宿主大肠杆菌广泛适合于异源蛋白质的表达，然而，异源蛋白质的高水平表达可损害细胞处理该重组蛋白质的能力。低温培养是一种用于增加可溶性蛋白的策略。但这种方法的一个缺陷是大肠杆菌伴侣蛋白（结合蛋白质促进蛋白质稳定折叠或部分折叠）会在较低的温度下失去活性。实验已经表明，在12℃大肠杆菌的大肠杆菌伴侣蛋白复合物的GroEL / ES仅保留约30％的重折叠的活性，而30℃才是它的最适温度。为了克服这个障碍，ArcticExpress能干细胞经过了低温下的蛋白改造。这些细胞可以表达对低温适应的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60（来自于嗜冷菌，Oleispira antarctica）。Cpn10和Cpn60伴侣蛋白相对于大肠杆菌的GroEL和GroES伴侣蛋白，分别有74％和54％的氨基酸同一性，并且在4-12℃显示出较高活性。在ArcticExpress细胞中表达时，这些伴侣蛋白在较低温度下进行着更优异的蛋白质加工，潜在地增加了可溶性重组蛋白的产率及其活性。

无论是使用DE3溶素原菌株的T7启动子，或可诱导的IPTG，还是使用非DE3溶素原菌株的非T7启动子， ArcticExpress菌株都可用于重组蛋白的表达。

为载体由T7启动子驱动的如PCAL矢量和pET载体表达的重组蛋白，可使用DE3溶素原ArcticExpress（DE3）宿主菌株。此宿主菌株含有染色体整合盒，其中T7 RNA聚合酶从lacUV5启动子表达。感应T7 RNA聚合酶的表达用IPTG导致T7启动子驱动的重组蛋白的表达。
如tac或trc启动子表达的重组蛋白，除从IPTG可诱导启动子比在T7启动子外，可使用非DE3溶素原ArcticExpress宿主菌株。

在大肠杆菌中异源蛋白的表达常受限于某些tRNA的数量稀少，而这些tRNA却在异源蛋白所属细胞中十分丰富。异源蛋白的大量表达会消耗稀有tRNA和细胞的运输。

ArcticExpress RP菌株在被改造后拥有了许多额外的基因片段，这些片段可以表达出那些稀有的tRNA，于是许多无法在BL21细胞中高效表达的异源蛋白便可在此菌株中高效表达。

ArcticExpress（DE3）RP细胞含有argU和proL基因的额外拷贝。这些基因分别编码识别精氨酸密码子AGA和AGG和脯氨酸密码子CCC的tRNA。该ArcticExpress RP菌株具有因缺失而经常限制有富含GC的基因组的生物体异源蛋白翻译的tRNA。
1、Low growth temperatures enhance protein folding and solubility
2、Feature chaperonins Cpn60 and Cpn10 from psychrophilic bacterium Oleispira antarctica
3、Correct for codon bias and enhance solubility at the same time

ArcticExpress(DE3)RP使用说明
1、本产品采用干冰运输，收到后请直接冻存于-80℃冰箱。
2、取冻存于-80℃的100μl感受态细胞于冰上融化；
3、加入1μl纯质粒，轻轻吹打混匀，冰浴30min；
4、将菌液放入42℃水浴中热激45sec，立即放入冰浴中2min；
5、加入900μl SOC/LB培养基，于37℃恒温摇床上150rpm×45min温育；
6、将菌液5000rpm×5min离心，弃尽上清；
7、取100μl新鲜LB培养基将菌体打散，均匀涂布于对应抗性平板表面；
8、平板可先正向37℃放置1h,待液体吸收完毕，再倒置37℃培养过夜。

ArcticExpress(DE3)RP注意事项
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。
3、混入质粒或连接产物时应轻柔操作，感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
4、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
5、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
6、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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