β-半乳糖苷酶显色试剂盒

β-半乳糖苷酶显色试剂盒

本试剂盒常用于核系统 AH109 酵母双杂和膜系统 NMY51 酵母双杂中 LacZ 报告基因的表达检测。当有互作发生，LacZ 报告基因表达，生成β-半乳糖苷酶，将无色的X-gal切割成半乳糖和深蓝色的底物 5-溴-4 氯靛蓝。

Hyykb09-50ml

产品内容：

Z buffer         50mL            4℃

β-ME            0.135mL         RT

X-gal 储存液     0.835mL         -20℃

运输及储存条件：蓝冰运输；各组分按照产品内容表中所示温度储存，保质期 18 个月。

β-半乳糖苷酶显色试剂盒

产品介绍：

本试剂盒常用于核系统 AH109 酵母双杂和膜系统 NMY51 酵母双杂中 LacZ 报告基因的表达检测。当有互作发生，LacZ 报告基因表达，生成β-半乳糖苷酶，将无色的X-gal切割成半乳糖和深蓝色的底物 5-溴-4 氯靛蓝。

操作步骤：

一、准备工作

1. 需要自行准备的材料

普通定性分析滤纸，灭菌处理；镊子，用来夹取滤纸；液氮。

2. 溶液配制

Z buffer/X-gal 溶液：5 mL Z buffer，13.5 μL β-ME，83.5 μL X-gal 储存液。根据需求量可按比

例扩大配制。

二、LacZ 报告基因检测

1. 先在一个培养皿中铺一张灭菌滤纸，再加 2.5-5.0 mL Z buffer/X-gal 溶液将滤纸润湿。

2. 用镊子夹取一张干净、干燥的滤纸放在长有新鲜菌落（一般 30℃培养 2-4 d）的平板上，

轻轻用镊子摩擦，帮助菌落附着在滤纸上。

3. 在滤纸上打不对称的孔，以标志滤纸的方向。

4. 当滤纸均匀湿润后，用镊子小心将滤纸从培养基上取下，将滤纸浸没在液氮中冷冻 10 s。

注：液氮冷冻目的是破坏酵母细胞壁，释放出胞内的β-半乳糖苷酶。

5. 取出液氮中冷冻过的滤纸，室温下融化。

6. 小心将滤纸有菌附着的那面朝上，放在第 2 步预处理的滤纸上，避免两层滤纸间产生气泡。

7. 盖上培养皿，将带有两层滤纸的培养皿置于 30℃或室温下，定期检查蓝色菌落的出现情况。

一般 8 小时之内变蓝的可初步判定为阳性克隆。

8. 在平板上找到与蓝色菌落相对应的菌落，挑相应的菌落到新的培养基平板上保存。

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