BL21-Gold感受态细胞

BL21-Gold感受态细胞

BL21-Gold Chemically Competent Cell

HYYWB92-10*100ul

基因型 E. coli B F- ompT hsdS(rB- mB- ) dcm+ Tet r gal endA Hte

BL21-Gold感受态细胞产品说明

BL21-Gold菌株来源于BL21菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，减少对重组蛋白的降解。BL21-Gold菌株的染色体中整合了一个有功能的Dcm甲基化酶，可以促进质粒的稳定，防止被自身的限制酶系统降解；引入了Hte基因，可以提高转化效率； 缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量、质量和稳定性。BL21-Gold菌株不含T7 RNA聚合酶，在不引入外源T7 RNA聚合酶时不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达 (如：pET系列)；含有大肠杆菌RNA聚合酶，可以用于tac或trc等使用大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达 (如：pGEX，pMAL质粒)；通过感染CE6噬菌体可将T7 RNA聚合酶引入BL21-Gold，诱导T7启动子驱动的蛋白表达 (如：pET系列)，这种方法完全没有泄漏表达，可以用于表达毒性基因。BL21-Gold感受态细胞具有四环素抗性，由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>5×108 cfu/µg DNA。 

BL21-Gold感受态细胞操作方法

1. BL21-Gold感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化或处于冰水混合状态时加入目的质粒，并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

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