GS115电转电击感受态细胞

GS115电转电击感受态细胞

（huayueyang2210）        

 GS115电转电击感受态细胞规格           

 GS115电转电击感受态细胞说明

GS115 是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。GS115毕赤酵母自身表型为Mut+，但是GS115转化株既能够产生出Mut+菌株，也能够产生出Muts菌株。目的蛋白在这两种转化株的表达水平可能是不同的，并且具有不可预测性，所以只有通过实验才能得到最好的酵母表达方案。毕赤酵母适宜的生长温度是28~30℃，温度超过32℃对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。GS115毕赤酵母是是组氨酸缺陷型（His4 基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10^-8。GS115毕赤酵母可以在YPD培养基中生长，或者在补充有组氨酸的minimal media中生长，但是无法在单独的 minimal media培养基中生长。

GS115电转电击感受态细胞操作方法

1. 取需转化质粒5µg，酶切，回收；

2. 0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min充分降温。

2. 取-80℃保存的GS115电转感受态插入冰中5min，待其融化，加入约1μg线性化的质粒DNA（体积不大于6ul，感受态转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。

3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=1500 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700μl无抗生素的YPG Plus并转移到感受态空管中，30℃振荡培养2-3h。

4. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应平板上，倒置放于28℃培养箱培养3-7d。

GS115电转电击感受态细胞注意事项

1. 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

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