还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒

可见分光光度法

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

货号：huayueyang1170

规格：50T/48S

还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体 60mL×1 瓶	4℃保存
试剂二	液体 50mL×1 瓶（自备）	4℃保存
试剂三	液体 15 mL×1 瓶	4℃保存
标准品	粉剂×1 支	4℃保存

溶液的配制：

标准品: 10mg 还原型谷胱甘肽 (GSH)。临用前加入 1mL 蒸水溶解，浓度为 10m/mL。2-8℃可以保存6周。

还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒

产品说明：

谷胱甘肽是由谷氨酸(Glu)半胱氨酸(Cys) 和氨酸(Gy) 组成的天然三肽，是一种含巯基(-SH)的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和 5.5二硫代-双(2-硝基苯甲酸)(5.5dithiobis-2-itrobenoic acid，DTNB) 反应产生 2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物 (GSSG)。2-硝基-5-疏基苯甲酸为黄色产物，在波长 412nm 处具有最大光吸收。

DTNB

GSH         TNB + GSSG

还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒

技术指标：

最低检出限：2.67 ug/mL

线性范围：3.125-250 ug/mL

需自备的仪器及用品：

分析天平、匀浆器/研钵/细胞超声破碎仪、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿。

操作步骤：

一、样本处理

1.组织处理:

新鲜组织首先用 PBS 冲洗2 次，然后称取动物组织或者植物组织 0.1g。加入试剂一润洗过的匀浆器中(匀浆器提前放冰上预冷):然后加入 1mL 试剂一 (组织/试剂一比例保持不变即可)，迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好): 8000g，4C离心 10min; 取上清液放置于 4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存3 天)

2.血液处理

血浆:将收集的抗凝血于 4℃,600g 离心10分钟,吸取上层血浆到另一支试管中,加入等体积的试剂一,4℃，8000g 离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于 4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存 3 天)。

血细胞: 将收集的抗凝血于4℃，600g 离心10分钟，弃去上层血浆用3倍体积的 PBS 清洗3次(用PBS重悬血细胞，600g 离心10分钟)，加入等体积试剂一，混匀后 4℃放置10分钟，8000g 离心10分钟，吸取上清放于 4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存 3 天)。

3、细胞处理

收集不少于 500 万个细胞，首先用 PBS 清洗细胞 2次 (PBS 重悬细胞，600g离心10分钟)，加入1mL 试剂一重悬细胞，反复冻融 2-3 次(可在液氮中冻结，37℃水浴中溶解) 或者进行超声(200W，超 3s，停 10s，重复30 次)，8000g 离心 10 分钟，收集上清于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存 (可保存 10 天)。

二、 测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 412nm，用蒸馏水调零。

2、标准品的准备:吸取10mg/mL标准溶液,用蒸留水稀释至200ug/mL、100ug/mL、50ug/mL、25ug/mL、12.5ug/mL。

3、标准品稀释表:

稀释前浓度（ug/mL）	标准液体积 （uL）	蒸馏水体积（uL）	稀释后浓度（ug/mL）
10000（即10mg/mL）	20	980	200
200	500	500	100
100	500	500	50
50	500	500	25
25	500	500	12.5
备注：实验中每个标准管需 100µL 标准液。

4、加样表：在 1.5mL EP 管中分别加入下列试剂

 

试剂名称（uL）	测定管	标准管	空白管
样本	100	-	-
标准溶液	-	100	-
蒸馏水	-	-	100
试剂二	700	700	700
试剂三	200	200	200
混匀后常温静置 2min 后分别测定测定管、标准管和空白管在 412nm 处的吸光度，分别记为A测定、A标准 和 A空白，计算 ΔA=A测定-A空白，ΔA标准=A 标准-A 空白。标准曲线和空白管只需做 1-2 次。

三、GSH 含量计算

1.标准曲线的绘制 

据标准管的浓度（x，μg/mL）和吸光度 ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA（y，ΔA）带入公式计算样本浓度（x，μg/mL）。

2.GSH 含量计算：

（1）按蛋白浓度计算

GSH 含量（μg/mg prot）=x×V 样÷（V 样×Cpr）=x÷Cpr

 

2. 按样本质量计算

GSH 含量（μg/g 质量）=x×V 样÷(V 样÷V 样总×W)=x÷W

 

3. 按细胞数量计算

 GSH 含量（μg/10⁶cell）=x×V 样÷(V 样÷V 样总×N)=x÷N

 

4. 按血浆（血细胞）体积计算

 GSH 含量（μg/mL）=2x

 

V 样总：上清液总体积，1mL；V 样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1mL；W：样本质量，g；Cpr： 上清液蛋白质浓度，mg/mL；N：细胞数量，以10⁶为单位计量；2：稀释倍数，血浆（血细胞）体积被稀释一倍。

还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒

注意事项：

1. 样本处理需匀浆完全，若当天不能完成测量，可放-80℃保存 3 天。
2. 若不确定样本中 GSH 含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。
3. 因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量，需另取组织。

4、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。