脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒
脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
货号：huayueyang020
规格：50T/48S
产品组成：
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
|
提取液 |
液体 60mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂一 |
液体 45 mL×1 瓶（自备） |
4℃保存 |
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试剂二 |
液体 45 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
|
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制：
试剂一：自备冰乙酸。
标准品：脯氨酸 10 mg，临用前加入 1 mL 蒸馏水，配成 10 mg/mL 标准品。
脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒
产品说明：
脯氨酸（Pro）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内 Pro 含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸（SA）提取 Pro，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色，在 520nm 测定吸光度。
技术指标：
最低检出限：0.1791 μg/mL
线性范围：0.5-40 μg/mL
需自备的仪器及用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理
1、细胞、细菌或组织样本的制备：
细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），之后置沸水浴振荡提取 10min；10000g，常温离心 10min，取上清，冷却后待测。
组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取 10min，10000g，常温离心 10min，取上清，冷却后待测。
2、血清（浆）样本：取 100μL 血清（浆）加入 0.9mL 提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取10分钟，10000g，常温离心10分钟，取上清，冷却后待测。
脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒
二、 测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 520nm，用蒸馏水调零。
2、标准品的处理：将标准品用蒸馏水稀释为 40、20、10、8、4、2、1、0.5μg/mL。
3、操作表：
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试剂名称（mL） |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
|
上清液 |
0.5 |
-- |
- |
|
标准品 |
- |
0.5 |
- |
|
蒸馏水 |
- |
- |
0.5 |
|
试剂一 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
|
试剂二 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
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混匀后盖紧盖子，缠好封口膜，置于沸水浴中保温 30min，每 10min 振荡一次，冷却后在 520nm 波长处比色，记录吸光值 A 测定管、A 标准管、A 空白管，计算 ΔA=A 测定管-A 空白管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。空白管只需做 1-2 次。 |
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三、Pro 含量计算
1、以标准溶液浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程y=kx+b，将ΔA代入方程得到x（μg/mL）。
2、按照细菌、细胞数量计算
Pro 含量(μg/104 cell)= x×V 提÷细胞/细菌数量=x÷细胞/细菌数量
3、按照组织质量计算
Pro 含量(μg/g 质量) =x×V 提÷W=x÷W
4、按血清（浆）体积计算
Pro 含量（μg/mL）= 10×x
V 提：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；细胞/细菌数量：以 104 为单位，万个；10：血清稀释倍数，（0.1+0.9）÷0.1=10。
脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒
注意事项：
1.提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。
2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
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