脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

货号：huayueyang020

规格：50T/48S

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体 60mL×1 瓶	4℃保存
试剂一	液体 45 mL×1 瓶（自备）	4℃保存
试剂二	液体 45 mL×1 瓶	4℃保存
标准品	粉剂×1 支	4℃保存

溶液的配制：

试剂一：自备冰乙酸。

标准品：脯氨酸 10 mg，临用前加入 1 mL 蒸馏水，配成 10 mg/mL 标准品。

脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒

产品说明：

脯氨酸（Pro）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内 Pro 含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

用磺基水杨酸（SA）提取 Pro，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色，在 520nm 测定吸光度。

 

技术指标：

最低检出限：0.1791 μg/mL

线性范围：0.5-40 μg/mL

需自备的仪器及用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理

 

1、细胞、细菌或组织样本的制备：

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），之后置沸水浴振荡提取 10min；10000g，常温离心 10min，取上清，冷却后待测。

组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取 10min，10000g，常温离心 10min，取上清，冷却后待测。

2、血清（浆）样本：取 100μL 血清（浆）加入 0.9mL 提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取10分钟，10000g，常温离心10分钟，取上清，冷却后待测。

脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒

二、 测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 520nm，用蒸馏水调零。

2、标准品的处理：将标准品用蒸馏水稀释为 40、20、10、8、4、2、1、0.5μg/mL。

3、操作表：

试剂名称（mL）	测定管	标准管	空白管
上清液	0.5	--	-
标准品	-	0.5	-
蒸馏水	-	-	0.5
试剂一	0.5	0.5	0.5
试剂二	0.5	0.5	0.5
混匀后盖紧盖子，缠好封口膜，置于沸水浴中保温 30min，每 10min 振荡一次，冷却后在 520nm 波长处比色，记录吸光值 A 测定管、A 标准管、A 空白管，计算 ΔA=A 测定管-A 空白管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。空白管只需做 1-2 次。

 

三、Pro 含量计算

1、以标准溶液浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程y=kx+b，将ΔA代入方程得到x（μg/mL）。

2、按照细菌、细胞数量计算

Pro 含量(μg/104 cell)= x×V 提÷细胞/细菌数量=x÷细胞/细菌数量

3、按照组织质量计算

Pro 含量(μg/g 质量) =x×V 提÷W=x÷W

4、按血清（浆）体积计算

Pro 含量（μg/mL）= 10×x

V 提：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；细胞/细菌数量：以 104 为单位，万个；10：血清稀释倍数，（0.1+0.9）÷0.1=10。

脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒

注意事项：

1.提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。

2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒