双荧光素酶报告基因检测试剂盒

双荧光素酶报告基因检测试剂盒

Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit

产品货号:huayueyang448        产品晚格:100T

双荧光素酶报告基因检测试剂盒本产品仅可用于科研实胜 严禁用于其他非科研

本试剂盒先以董光素Ouciferin]为底物来检测整火虫董光素酶(Fireflyluciferase)，后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海露营光素酶Renillaluciferase)，并且在后续加入海育营光素酶底物时，同时加入抑制董火虫受光素酶催化luciferin发光的物质。 使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性，实现观黄光素阿报告基因检测，

萤火虫蛋光素酶是一种分子量的为61kD的蛋白，在ATP、糕离子和氧气存在的条件下，可以催化lucferin氧化成oxyluciferin, 在luciferin氧化的讨程中，实发出生物营bclminescence)。海者带光奇酶器一种分子量约为36k刀的蛋白，在氧气存车的条长

葡火虫蛋光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾黄光素酶催化coelenberazine发光的最强发光波长为

通常将目的基因的5UTR或者启动子克隆至FireftyLuciferase的上游，或者3UTR克星至FireflyLuciferase的下游，通过检测董 火虫荧光素酶的量来检测启动子或者调控元件的转录调控作用。Renila Luciferase作为内参，来消除细胞数董或者转染效率的差异，

双荧光素酶报告基因检测试剂盒

试剂金组成:

双荧光素酶报告基因检测试剂盒

注意:

1.细胞裂解液在9心孔板中裂解，可以用200次以上。

2.细胞髡解液，黄火虫荧光青酶脸测堰冲液，Renilla受光素酶检测缓冲波在4可以保存一个月。-20℃可以保存一年，-70C可以长期保存;董火虫荧光素酶检测底物和Renilla荧光素降检测底物在20°C可以保存六个月，在-70°C可以保存一年。

双荧光素酶报告基因检测试剂盒

操作方法:

葡火虫荧光素酶检测缓冲液临用前加入100x萤火虫荧光素酶检测底物。标记为营火虫荧光素酶检测试剂;Renila荧光素酶拉测缓冲液临用前加入50xRenila荧光素酶检测底物，标记为Renilla荧光素酶检测试剂。此检测工作液周现配现用。

1.爱解细胞

根据不同的细胞培养板加入适量的细的装解液

a.对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后用1xPBS润洗2遍后加入细胞裂解液。使裂解液完全覆盖地胞 b.对于悬浮细胞:商心去上清后用1xPB5润洗2遍后离心去上清，加入细密裂解液。

6.于振落备上室温裂解20min以裂解充分，

注:细胞裂解后可以立即测定荧光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需难解，并达到室温后再进行测定，2,荧光数值脸测(酶标板中授作)

寄样本、蕾火虫荧光素酶检测试剂，Renilla荧光素酶脸测试剂平街至室温后再进行以下操作 a.取20pL图胞警箭样本，加至黑色酶标板中，按照实验要求，可设置了-5孔重复。

6，每孔加入100uL萤火虫荧光素酶检测试剂，用移液圆轻柔吹打混匀后QD560nmd处读数;以不含细电的细胞制解液为空白对酸，检测尽量在30min内完成，

c.每孔加入100uL Renila荧光素酗检测试剂，使用酶标收震落漫匀后QD465cm外津数。以不含旧取的细胞聚解法为空白对照，检测尽量在30min内完成。

3.计算荧光比值

在以Renilla受光素降为内参的情况下，用带火虫荧光素陶测定得到的RLU(relativelightunit)值除以Renila荧光素酶测定得到的RLU值。根据得到的比值来比较不同样品问目的报告基因的激活程度。

注意事项:

1.无菌操怍。

2.荧光染料操作中注意避光进行。

3.由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。

4.为保证受光素酶检测试剂的稳定性，可以采取透当分装后避光保存的方法，以避免反复冻触和长时间暴用于室温

5.董火虫受光素酶检测试剂。Renila荧光素酶检测试剂最好现用现配。

6、坦加型解液及髡解时间可根据组的量适当增加，延长，

7.关于检测仪器的选择:能够检测化学发光或者生物发光的仪器都可适用于此试剂合。如果使用多功核游标仪，为防止备孔之间的干扰，我们推荐使用黑色酶标板，并且不同实验细之间最好有问隔。

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