植物叶绿体蛋白提取试剂盒

植物叶绿体蛋白提取试剂盒

Plant Chioroplast Protein Extraction Kit

产品货号:huayueyang450           产品规格:15次

本产品仅可用于的研实验，严禁用于其他非科研用边

本试剂拿是结合植物叶候体修化试剂食和细菌蛋白压提取试剂盒而推出的新兴产品，专门用干植物叶绿体蛋白的快速提取。

 植物叶绿体蛋白提取试剂盒

产品特点:

1.邱用型试剂富。用户不需要单独配制备种溶液.

2.本产品足够15次提取，每次可处理30g叶片。

3.得到的提取物可以直接用于5DS-PAGE、2D电涂、免疫印迹分析、蛋白活性测定和BCA法及Lowry法蛋白定量(不适用于

4.已经成功用于菠菜、大豆、莴笋、白菜、烟草和甜菜等植物，还可用于更多植物(可能需要优化条件)。

植物叶绿体蛋白提取试剂盒

产品相成:

保存:RT，其中溶液A和溶液B需盖于-20”C保存，有效阳一年

植物叶绿体蛋白提取试剂盒

使阳方法;

叶细体对温度高座转感，所以整个提作必须在冰上或者在冷室进行。所用各口和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行，需心力以q而不是rpm计算，如果需要研究叶绿体的功想，提取还需要在昏暗的光线条件下进行。

一、叶绿体的纯化

1.实验前1-2天将植物故在暗室墙养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成，否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂，叶片在实验菌需先用自来水洗净，再用蒸鹰水淋选，去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理，则保存时需要保持叶片湿润，即使如此，叶片的放置时间也不能超过一天。

2.新鲜(实验当天)制备匀装液:将自备的去离子水与匀浆液成分一按4:1的比例混合，然后在混合波中加入匀装液成分二干积到终家度0.7%(每100mL中加入0.1g干粉)，掘晃溶解后所得溶液即为匀装液，冰上预冷特用。一次实验(从30g叶片提取叶绿体]所需要的匀求波体积跟材料不同而不同，

3.新鲜采集植物叶片，快速去除叶脉并将叶片剪成1-3cm2大小的碎片井浸泡在适量的预冷的匀浆液中 |每克叶片加4mL匀浆装，包对烟草和大豆，每克叶片需要加6mL匀蒙波!。

4.寄浸泡了叶片的匀杀波转移到Waring匀隶机(即家用制备果汁的匀浆机)中，低速匀装10秒，继免起泡沫。用发璃棒把波面的碎片找人匀装机底越后，再低妹匀第1秒。

注意:除Warng匀家机外，还可以选择Dounce玻璃匀装器，Polvtron匀家机和研磨(加玻璃珠)等装解细电的方法，但这些方法的单次外理量都比较小，周分成很名小畅地独匀装，然后再汇集。

5.用带柄尼龙滤膜过滤匀聚液，可先将滤波收集到预冷的200mL量简中，再等分到4个预冷的50mL的塑料毒心管中|每个管中的滤液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜后可反复使用。

6.在水平转子离心机上49C 200g离心3分钟(对蔬菜，白菜和黄芦材料)或400g离心1分钟(对甜菜材料)，白色沉淀为未破爱的细胞或细胞核。

7.将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中，

8.在水平转子离心机上4℃ 10000商心7分钟，小心弃上清，沉淀含叶绿体。呈浅绿色，

9.在沉淀中加入1.5mL预冷的勾瓷液，手弹再心管底部使叶绿体重易。注意:

8、生悬时最好避免容液起淘，也不要用枪头吹打，否则叶绿体容易破裂。 b. 沉淀下有白色淀粉属于正常现象，但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重量。

10.需4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL]，得到叶绿体相提液，可直接用于后续的SDS-PAGE，Western，EUISA和蛋白坦分

11.如果需要以之为材料精提叶掘体，就需要用密度梯度离心法的完楚的叶绿体和其他污染物进一步分离。具体授作步豪是;在

50mL塑料离心管中先加入心rmL匀装液成分一和4mLPercoll，充分混合均匀。在其波面上小心铺上叶绿体相提液。在水平转子离心机上4℃1000g商心8分钟，管底绿色沉定为完楚的叶摄体，小心将上清倒出后。用于叶握体蛋白提取。

二、叶绿体蛋白后的提取

12.将1mL的溶液A和100pL溶液B加入到叶绿体沉淀(约15mg湿重)中，吹打混匀，13,冰上放置30分钟至1小时至溶液变清。14.4C 12000g离心1分钟。

15.寄上清液转移至一新的1.5mL塑料需心管中即得到蛋白溶液。可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分样品到离心管中，加入5x5DS-PAGE上样援冲液〔终浓度为1x)，在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

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